植物的rna为啥提取出来纯度每次都很低

dxy_8t0ljry9

2022-08-18

哪位大佬能告诉我，我提拟南芥的RNA，用的是Rna-easy-isolation-reagant裂解液，用研钵进行研磨，研磨前也预冷了，戴口罩了，台面也擦了去rna酶的试剂了，也按照说明书进行了，为啥提出来的RNA都是在1.3-1.5之间，1.8就上不去这是为啥？

一开始队的研磨本来用的是机器研磨，后来都用手磨了，手磨时候都先预冷，充分用液氮研磨。中间的室温忘了改了是在4度冰上进行，一直到12步骤为止，都是提取rna的步骤。我想请教各位大佬，我这里哪里出问题了嘛都是按照说明书的。

illusio

2022-08-18

有帮助

可能是有蛋白污染了，也有可能是乙醇没有吹干就溶解了，也有可能是样本本身不是很好，有脂肪、糖等的污染。可以纯化一下看看

Topmicro

2022-08-18

有帮助

看你步骤研磨应该没有问题，纯度和你的研磨没有关系，考虑一下洗涤部分。

Eason老歌迷

2022-08-18

有帮助

如果提取rna的纯度很低，可能是你的组织或细胞中 RNA 含量偏低，不同细胞或者组织中RNA的丰度不一样，RNA提取量也不一致。也可能是样品起始量太少或者太多，样品起始量太少，则细胞组织中RNA含量较低，样品过多则超过裂解液的裂解能力，使得裂解不完全，从而RNA得率低。

whilt-shirt

2022-08-18

有帮助

有可能是提取过程中75%乙醇清洗次数少了，建议多洗几遍