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PCR扩增3Kb基因片段
汤姆卜丽波
不算特别大,可以p出来的,我们p过
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问
请问怎么两条DNA链杂交,怎么模拟二级结构,计算自由能呀?
bamboopiggy
你习惯用什么软件设计引物?一般设计引物的软件都可以模拟,例如vector NT,或者snapgene
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问
做PCR为什么用无酶水
genecreate
PCR原本就是Taq酶的扩增反应,水里面就不能含有其他酶;PCR用的水也是纯水
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问
合成的引物有退火温度,按照它的
申东熙老伯
可以的,也可以直接做touch downPCR。
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问
PCR的对照组和空白组有什么区别?
申东熙老伯
对照分为阴性对照和阳性对照。空白对照是阴性对照的一种,指把样品换为水。阳性对照是指一定可以P出来的,结果可信的对照。
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问
关于PCR检测自动化问题
汤姆卜丽波
就是因为采样这个过程无法达到自动化呀,因为存在个体差异,全自动的话成本太高了
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问
这个是引物二聚体吗,cDNA,引物刚用过,pcr程序一样的,没问题,是什么操作还是其他原因导致的吗
bamboopiggy
不管是不是引物二聚体,这个数据不能用。你提的rna的质量如何?还有你反转的cDNA是第一次用么?如果是第一次用可能是cDNA质量不好。
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问
我的PCR内参有CT值,目的基因测不出CT值,请问是什么原因(有图)
Topmicro
你查到的是对的,重新设定一下阈值看看,就是将选取的荧光强度调高。
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问
miRNA加尾法进校qPCR的通用引物序列,请问哪位大佬能提供一下
秋秋欣欣
我用的U6引物序列是① U6snRNA F Primer 5‘ATTGGAACGATACAGAGAAGATT② U6snRNA R Primer 5’ GGAACGCTTCACGAATTTG
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问
可变剪接设计引物
秋秋欣欣
Gene,搜索选择相关的不同的isoform:点击其中一个isoform,复制全部序列到snapgene把四个isoform全部保存:点击第一个进去,进行编辑:首先在NCBI GENE里找到CDS(编码区),复制,ctrl+F到snapgene里,Features-add feature,命名为COS,其他三个isoform复制进来:这里的红色就代表外显子跳跃事件,我们将外显子跳跃事件的碱基复制,
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问
PCR 琼脂糖凝胶电泳 基因鼠鉴定
Eason老歌迷
胶上有很多划痕?有照片吗?感觉对实验结果影响不大,应该没事。
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问
荧光定量pcr标曲斜率过低,但是R2正常,是什么原因
whilt-shirt
有可能是qPCR的试剂问题,建议更换试剂后重试
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问
酿酒酵母酵母菌落pcr
Topmicro
和你是否诱变过关系不大,你可以拿一个没有诱变过的作对照,跑一下看看。
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问
qPCR点样时需要冰上操作吗?
balalaLy
如果你加样快数量少加完就跑的话可以不用冰,但是时间久的话毕竟里面有酶会失活影响结果,冰上不会有冷凝水
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问
投稿时,qPCR有数据不是很完美会被拒稿吗?
yanlai000
内参35???重新提RNA吧,完了测浓度
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问
目的条带先胶回收再双酶切还是双酶切再胶回收
balalaLy
先少量跑胶验证目的条带是否存在,如果条带单一,可以直接用剩下的做双酶切
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问
如何检测耗材上的DNA酶和RNA酶
illusio
一般用PCR检测,电泳基本检测不出来
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问
qPCR怎么会有这种扩增曲线?
秋秋欣欣
机器没问题的话,应该是环境有污染了,或者你的试剂有污染
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问
荧光定量PCR检测LC3-I/II
balalaLy
LC3B相当于LC3-11,一般是检测LC3B的rna水平
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问
PCR温度剃度如何快速摸索出来
illusio
一般情况下合理的退火温度约是从55℃到70℃。退火温度的设定一般要比引物的Tm低5℃。实验过程中设置退火温度时应比引物产品说明书标明的退火温度高出1℃~2℃最佳
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