dxy_2477pov
简简单单的8872
减少引物浓度、调整Mix中镁离子用量、优化循环条件(采用两步法)降低引物二聚体的影响。NTC扩增出曲线可能是操作过程中或操作环境出现了污染,保证操作无误,清洁环境即可。引物多次冻融会影响浓度,不影响特异性。
毛利小五郎的徒弟
减少引物的使用量,建议把加入引物的量减少一半试试,一般PCR体系里引物是过量的,减少引物的量对PCR反应影响不大,但是能一定程度上降低引物二聚体,毕竟引物少了,两对引物间两两结合的概率也就低了。
行而上学不行
最根本的解决方法就是重新设计引物。从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法。 检查Taq酶,引物,Mg2+的浓度,如果浓度过高,可降低它们的浓度。检查模板。可能模板有问题,模板浓度过小,适当加大模板量
NTC对照扩增出曲线,可能是引物二聚体导致,可以进一步优化引物,也可能是反应体系污染,可逐步排除污染源。
引物冻融多次会影响其特性。
juyue2010
提高退火温度,降低引物浓度,降低镁离子浓度,或重新设计引物。
引物分装,尽量避免反复冻融。
dxy_2477pov
NTC扩增出阳性结果怎么办?
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