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冻融法回收DNA片段

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2853

1.  紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条,将切下的胶条(小于0.6g)捣碎,置于1.5ml离心管中;

2.  加入等体积的Tris-HCl饱和酚(pH 7.6),振荡混匀;

3.  -20℃放置5-10min;

4.  4℃离心10000g×5min,上层液转移置另一离心管中;

5.  加入1/4体积H2O于含胶的离心管中,振荡混匀;

6.  -20℃,放置5-10min;

7.  4℃离心10000g×5min,合并上清液;

8.  用等体积酚/氯仿、氯仿分别抽提一次,取上清;

9.  加入1/10体积3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍体积预冷的无水乙醇,混匀;

10. -20℃,静置30min;

11. 4℃离心13000g×10min,弃上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;

12.  加适量H2O或TE溶解沉淀。

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