冻融法回收DNA片段操作步骤
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1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条,将切下的胶条(小于0.6g)捣碎,置于1.5ml离心管中;
2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚(pH 7.6),振荡混匀;
3. -20℃放置5-10min;
4. 4℃离心10000g×5min,上层液转移置另一离心管中;
5. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中,振荡混匀;
6. -20℃,放置5-10min;
7. 4℃离心10000g×5min,合并上清液;
8. 用等体积酚/氯仿、氯仿分别抽提一次,取上清;
9. 加入1/10体积3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍体积预冷的无水乙醇,混匀;
10. -20℃,静置30min;
11. 4℃离心13000g×10min,弃上清,75%乙醇洗沉淀1-2次,晾干;
12. 加适量H2O或TE溶解沉淀。