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求问DNA片段连接pEASY vector

相关实验:用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验

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月月年年总相见

我有个2800多长的片段,DNA扩增、胶回收、连pEASY、转化到大肠杆菌感受态、涂板、挑点、菌液PCR,可是菌液PCR一直不出带,都是100左右的引物二聚体,之前有三个片段都成功连上了,测序也正确,那操作应该没问题,我怀疑是片段扩增的不对,我又用新的模板重新扩增,但是菌液PCR还是不出带,我不知道是什么原因,求请前辈们指点一下我吧,万分感谢

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2 个回答

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huarenqiang5

有帮助

建议用质粒、电泳、菌落PCR进行验证,也可能是菌液时,细菌表面的质粒已被稀释了很多倍,所以P不出来。

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月月年年总相见user-title

就是先提质粒,再用质粒做模板PCR、电泳看条带吗?

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

考虑还是引物不合适,你换个引物试一下。

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月月年年总相见user-title

我能拿这个引物扩增还有送测序,会是引物的问题吗

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