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    求问DNA片段连接pEASY vector

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    月月年年总相见

    我有个2800多长的片段，DNA扩增、胶回收、连pEASY、转化到大肠杆菌感受态、涂板、挑点、菌液PCR，可是菌液PCR一直不出带，都是100左右的引物二聚体，之前有三个片段都成功连上了，测序也正确，那操作应该没问题，我怀疑是片段扩增的不对，我又用新的模板重新扩增，但是菌液PCR还是不出带，我不知道是什么原因，求请前辈们指点一下我吧，万分感谢

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    2 个回答

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    huarenqiang5

    有帮助

    建议用质粒、电泳、菌落PCR进行验证，也可能是菌液时，细菌表面的质粒已被稀释了很多倍，所以P不出来。

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    月月年年总相见user-title

    就是先提质粒，再用质粒做模板PCR、电泳看条带吗？

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    土井挞克树

    有帮助

    考虑还是引物不合适，你换个引物试一下。

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    月月年年总相见user-title

    我能拿这个引物扩增还有送测序，会是引物的问题吗

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