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构建重组载体转化大肠后测序,序列总有突变,可以从那些方面分析原因?

相关实验:用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验

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老陈味

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3 个回答

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闭门羹牛

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可能酶产物碎了一些,这样连进去就有大有小。如果你引物用的是在载体上的,那很可能扩出大小不同的。如果你引物就是在基因上的,这个好解决,你把退火温度逐渐提高,看看是不是那个不同片段就没了

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vae1476

有帮助

可以多做几个,多选几个克隆进行测序,保证总有一个是好的,需要注意要用高保真酶

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bamboopiggy

有帮助

首先把你的模版拿去测序,我遇到过因为模版有问题,结果怎么改条件都不行。2.如果实在不行,设计引物,把突变的地方再给它突变回来。我当时就是发现模版也有mutation,只能自己给它纠正回来

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