用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验

DNA 实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

当 Sanger 及其同事建立第一个 DNA 链终止延伸法时，只有一种合适的 DNA 聚合酶可用，即大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段。它具有在模板存在时聚合 dNTP 的活性，但缺乏完整聚合酶 I 的 5'-3'外切酶活性。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册，作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。

来源：丁香实验

操作方法

用大肠杆菌 DNA 聚合酶 I Klenow 片段及单链 DNA 模板进行双脱氧测序实验

材料缓冲液和溶液试剂、缓冲液，储液的组成参见附录 1, 储液使用前稀释到适当浓度。 dATP(0.1 mmol/L) 可选，参见步骤 4。去离子蒸馏水 EDTA(10 mmol/L,pH8.0) 延伸/终止混合液和示踪混合液这些反应混合液可通过混合 dNTP 和 ddNTP 储液制备，参见表 12-7。甲酰胺上样缓冲液 TM 缓冲液 100 mmol/LTris-Cl(p