冻融法回收DNA片段的操作步骤

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DNA连接与转化

1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条(小于0.6g)捣碎，置于1.5ml离心管中;

2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚(pH 7.6)，振荡混匀;

3. -20℃放置5-10min;

4. 4℃离心10000g×5min，上层液转移置另一离心管中;

5. 加入1/4体积H2O于含胶的离心管中，振荡混匀;

6. -20℃，放置5-10min;

7. 4℃离心10000g×5min，合并上清液;

8. 用等体积酚/氯仿、氯仿分别抽提一次，取上清;

9. 加入1/10体积3M NaAc(pH 5.2)、2.5倍体积预冷的无水乙醇，混匀;

10. -20℃，静置30min;

11. 4℃离心13000g×10min，弃上清，75%乙醇洗沉淀1-2次，晾干;

12. 加适量H2O或TE溶解沉淀。