脆饼cbb
之前我用了10ul的体系 cdna原液0.4ul 引物前后加起来1ul mix5ul 剩下的用水补足 这样跑 跑出来的内参28多,太低了,曲线还是比较正常的
我调整了之后改为 cdna原液 1ul 引物加起来1ul mix5ul 剩下的用水补足,这样跑跑出来的那个曲线又不正常,ct值比之前好一点,内参还是没进20,这是啥问题啊啊请教大家
毛利小五郎的徒弟
1. 加样误差导致:定期校准移液器;同时可先配制除模板以外的其他试剂的预混液,然后进行分装再加入模板,其次加大模板上样体积,以上均可降低移液误差的影响。
2. 模板浓度越低,重复性越差。建议提高模板量,使Ct值在15-30之间。
脆饼cbb
模板指的是rna的浓度对吗
dxyc42u
溶解曲线看起来好像有杂锋,可能是出现非特异性扩增了
小小小小小芳
. 可能存在污染:建议对样本进行复检。如果是阴性对照,可能是引物二聚体或污染导致;如果是正常样本,说明浓度过低或者加样量不足。
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