我的qpcr扩增曲线有的居然是从零点开始扩增的…请教一下这是咋回事呢

脆饼cbb

2022-12-11

之前我用了10ul的体系 cdna原液0.4ul 引物前后加起来1ul mix5ul 剩下的用水补足这样跑跑出来的内参28多，太低了，曲线还是比较正常的

我调整了之后改为 cdna原液 1ul 引物加起来1ul mix5ul 剩下的用水补足，这样跑跑出来的那个曲线又不正常，ct值比之前好一点，内参还是没进20，这是啥问题啊啊请教大家

毛利小五郎的徒弟

2022-12-12

有帮助

1. 加样误差导致：定期校准移液器；同时可先配制除模板以外的其他试剂的预混液，然后进行分装再加入模板，其次加大模板上样体积，以上均可降低移液误差的影响。

2. 模板浓度越低，重复性越差。建议提高模板量，使Ct值在15-30之间。

脆饼cbb

2022-12-13

模板指的是rna的浓度对吗

dxyc42u

2022-12-12

有帮助

溶解曲线看起来好像有杂锋，可能是出现非特异性扩增了

小小小小小芳

2022-12-12

有帮助

. 可能存在污染：建议对样本进行复检。如果是阴性对照，可能是引物二聚体或污染导致；如果是正常样本，说明浓度过低或者加样量不足。