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科研学霸天团，48小时有问必答
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构建载体最后测序乱码怎么办？
是TTT
插入片段有过测序结果吗?是挑的单克隆提的质粒吗?p出来的产物跑的DNA凝胶是单一且很亮的条带吗?有没有杂带或者拖尾呢?
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问
影响连接转化的因素
是TTT
影响转化的因素:1.感受态细胞的状态、2.加入的质粒最好在≤200ng，3.热击1-2分钟以后，需要立刻放在冰上静置2分钟，4.摇完菌以后离心需要常温，这些没做好都会影响转化效率。影响连接的因素:1.载体是否线性化完全，一般来说双酶切要优于单酶切，但也和酶切的温度与时间有关；2.线性载体和插入片段之间的比例需要计算好；3.连接酶以及缓冲液的量需严格按照说明书使用
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问
做重组蛋白，构建质粒（无his-tag）
asswei
通过设计引物，添加his-tag，克隆到质粒中去。
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问
载体双酶切胶回收后能在-20摄氏度保存多久呢
loveliufudan
双酶切胶回收后的DNA样品可以在-20摄氏度长期保存，通常可保存6个月至1年。存储时需要注意以下几点：使用无菌的冷冻保存管保存样品，并确保样品在保存管中完全干燥。在保存之前，检查样品的纯度和浓度，以确保其符合您的实验要求。避免反复冻融样品，因为这会降低DNA的质量和纯度。在保存过程中定期检查样品的质量和纯度，以确保样品适用于后续实验。需要注意的是，对于一些敏感的DNA样品，如RNA或者低浓度的DN
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问
荧光信号问题
loveliufudan
在核酸检测中，实验组加入了DNA模板，而空白组中只有用水代替模板，因此实验组应该会有更多的靶分子（模板）可供引物探针与之匹配，从而发生聚合酶链式反应 (PCR)。这会导致实验组反应体系中产生更多的荧光信号，因为PCR产物与探针发生结合后荧光染料被激活，发出荧光信号。相比之下，空白组中没有模板的存在，PCR反应几乎不会发生，因此会产生很少的荧光信号。此外，空白组中可能会存在背景噪音或杂质信号，但这些
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问
质粒电转到毕赤酵母感受态后，涂板，长出菌后，做菌落pcr怎么做
loveliufudan
可以尝试用快速菌落PCR的方法来提取和扩增酵母菌的质粒DNA。具体步骤如下：用菌落PCR提取酵母菌的质粒DNA，具体步骤如下：选取酵母菌菌落，用无菌的PCR管刮下一小块菌落。加入10-20 μL TE缓冲液（pH8.0）或蒸馏水，用微量吸管或者细管破碎菌落。加入 1 μL 蛋白酶K，37℃ 孵育5-10 分钟。注意不要过度消化。将管子放入100℃的水浴中，热搅拌10分钟使细胞裂解，然后放到冰上冷却
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问
提取甘油菌质粒的时候，用错了培养基有何影响
loveliufudan
使用LB培养基提取甘油菌质粒相对于使用2xYT培养基，可能会对质粒数量和质量产生一定的影响，但具体影响的大小会受到多种因素的影响，如培养时间、培养温度、细胞密度等等。一般来说，2xYT培养基比LB培养基营养更丰富，支持细胞生长和代谢的能力更强，因此使用2xYT培养基培养甘油菌会产生更多的细胞和质粒，且质粒更加稳定，得到的质量也相对更高。而使用LB培养基可能会导致细胞生长缓慢，产量较低，质粒含量和质
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问
5mol/L氯化钠溶液配制
毛利小五郎的徒弟
配制时加热或者适当加压可以助溶。
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问
基因敲除，需要知道菌株的全基因组信息吗
毛利小五郎的徒弟
最好是知道全基因组的信息，至少是功能区的。有全基因组信息可以避免勿敲，提高精确性
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问
【求助】3t3成脂诱导
huarenqiang5
培养注意事项:1.培养密度一般控制在40-60%的汇合度，过高的汇合度，细胞可能会开始分化；2.注意血清类型。一般使用的是新生牛血清培养，用胎牛血清生长速度会加快 ，容易使细胞分化；3.传代时铺板需均匀，不然会导致分化不均匀，分化比例低。4.从添加诱导剂开始到分化结束，通常需要8天。一般第6天脂滴就出来了，剩下2天就是脂滴积聚的过程。分化效果好的话，第4天脂滴就出来了；5.3T3-L1细胞添加诱导
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痤疮丙酸杆菌
毛利小五郎的徒弟
痤疮丙酸杆菌在液体培养基中的照片如图
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bmdm提取
huarenqiang5
如果不是大幅度的晃动一般来说没什么影响。
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问
有没有做磁珠分离大鼠肺组织肺间质巨噬细胞的老师呢
loveliufudan
下面是一些可能适用于您的实验室的试剂盒和磁珠供您参考：大鼠肺间质巨噬细胞磁珠分离试剂盒，例如 Miltenyi Biotec 公司的大鼠肺间质巨噬细胞分离试剂盒。这个试剂盒采用磁珠分离技术，能够高效地纯化大鼠肺组织中的巨噬细胞。Dynabeads 公司的 CD11b+ 磁珠。这种磁珠可以选择大鼠 CD11b+ 阳性细胞，包括肺间质巨噬细胞等，从单细胞悬液中高效纯化。大鼠巨噬细胞表面标记的特定抗体和
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cbioportal生信分析
loveliufudan
是的，cBioPortal可以分析某基因在不同子宫内膜癌分子分型中的表达差异。以下是步骤：进入 cBioPortal 的网站并选择 TCGA-UCEC 数据集。在左侧的“Quick Select”栏中，选择您感兴趣的基因名称，例如PAX8。点击“Case Sets”选项卡，选择您感兴趣的子宫内膜癌分子分型。点击“Charts”选项卡，选择您想要的表达分析类型，例如“mRNA Expression
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单细胞测序seurat分析为什么合并样本分析后图还是五个导入样本
loveliufudan
在单细胞测序的分析中，合并多个样本可以增加数据量，提高分析的可信度和准确性。一般来说，单细胞测序实验的数据量较小，单个细胞的表达水平变化也较大，因此需要对多个样本进行合并，才能获得稳定的结果。对于您提到的情况，可能是因为在Seurat分析中，您在合并样本之前已经导入了五个样本，然后合并前两个样本，但是在后续的质控步骤中，您可能没有正确更新分析的对象，导致分析结果显示了所有五个导入的样本。您可以检查
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提取的大肠杆菌rna ，图1图2最上面条带是啥，很费解。
毛利小五郎的徒弟
可能是大肠杆菌裂解后的16S，23S。
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求助啊，为什么DNA条带跑不出来
毛利小五郎的徒弟
可能是dna太大了，与胶的浓度不符，所以没有跑出来
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PCR扩增10微升可以25微升无条带是为什么?
毛利小五郎的徒弟
上样量太大以后，会加重pcr负荷，导致失败
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提取植物内生菌DNA
毛利小五郎的徒弟
可以直接用提取后再分离纯化，也可先分离纯化然后再提取
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硫酸铵沉淀
weiran0928
看样子可能是盐浓度过高导致的。这里的80%是指饱和硫酸铵的80%浓度吗，也就是终浓度3.2M？这个浓度是比较高的，建议做个硫酸铵沉淀的浓度梯度，用更小的浓度沉淀更好。一般来说，50%以上差不多就够了。要么就减少上样量。
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