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如何用曲线图表征琼脂糖凝胶电泳中条带的亮度来表征DNA含量

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仰望星空4IZG

通过用曲线表征琼脂糖凝胶电泳的条带亮度来大致定量DNA含量的多少

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3 个回答

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loveliufudan

有帮助

可以按照以下步骤进行:

1. 进行琼脂糖凝胶电泳:将不同浓度的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,以分离DNA片段。使用一组标准样品,其中包含已知浓度的DNA片段,以便用作比较参考。

2. 图像获取和分析:使用凝胶图像获取设备(如凝胶成像系统)获取琼脂糖凝胶电泳的图像。然后,使用图像分析软件(如ImageJ或GelAnalyzer)对图像进行分析,测量每个DNA条带的亮度。

3. 绘制曲线图:将DNA样品的浓度(或相关的质量)作为X轴,将条带的亮度作为Y轴。使用所得到的数据绘制曲线图,以显示DNA浓度与亮度之间的关系。

4. 标定曲线:使用已知浓度的DNA标准样品的数据点,通过拟合曲线的方法来标定曲线。这样,您可以根据曲线上的亮度值推断未知DNA样品的浓度。


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清澈的微风

有帮助

          

如果DNA出现降解或者是混有其他杂质,例如蛋白质、RNA的话,那么琼脂糖凝胶就能够检测得到DNA的质量。

标准主要是通过观察电泳条带的亮度,通过亮度就可以粗略地计算出DNA条带的含量。如果DNA出现损失,对应的条带就会变暗或者是消失。


线性的单一DNA样品一般是单条带质粒的话可能会有2-3条带

如果条带变宽、变暗、或者变成弥散的DNA条带,表示DNA非特异的降解.

如果条带变成多条表示可能被酶切如果质粒被单酶切,可能变成一条亮带.

如果有蛋白质污染,上样孔可能发亮如果有RNA污染可能小分子量部分会有弥散



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huarenqiang5

有帮助

可以看看这篇文章,讲的非常详细。《应用凝胶成像分析系统定量测定 DNA含量的检测范围》

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