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科研学霸天团，48小时有问必答

问菌液pcr检测重组质粒跑出来条带很弥散，是怎么回事，胶没问题

bamboopiggy

菌落pcr 条带弥散没什么，因为菌落里很多杂七杂八的东西，只要你要的目的条带能出现就可以。或者也可能是你的buffer，或者是胶配的不匀，感觉你的marker也有点弥散

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问在构建质粒时，菌落pcr的条带都是对的，但是测序结果都是缺少目的基因那一段，这是为什么呢？

汤姆卜丽波

可以做个菌液pcr再看看，有很大可能性是连接产物中有剩余目的基因，也可以单扩一个引物看看是不是引物污染，提个质粒跑一下

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问磁珠法植物DNA提取试剂盒提取的核酸，纯度只有1.1左右，是什么原因？应该如何调整？

bamboopiggy

你的去蛋白液和漂洗液中是否忘记入无水乙醇？或者是你组织液氮研磨不充分？

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问CTAB法提取植物基因组DNA总失败，怎么做才能成功？

Eason老歌迷

我觉得你可以注意以下几点。你磨样的时候一定要使材料处于低温状态。不然啊DNA降解得很厉害。加入异丙醇后，出现的DNA絮状物给他挑出来，不要离心，不然不完整的DNA会增多。

4 回答308 围观

问qPCR产物跑胶电泳条带弥散，条带大小为一百多bp，尝试更换qPCR的条件以及电泳条件，结果依然如故，不知道什么原因

琴妞313

可能是引物浓度不对，建议重新定引物

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问用KOD高保真酶做PCR扩增200+bp产物，模板含量低，延伸时间分别设1,5,10s，相对Taq酶出现很多非特异扩增，怎么办？

Eason老歌迷

可以适当的加入dmso，来增加特异性。也可以适当提高退火的温度

4 回答91 围观

问DNA转录技术需要注意的易错细节有哪些？

Eason老歌迷

所有试剂均用高压灭菌双蒸水配制。用大口滴管或吸头操作，以尽量减少打断 DNA 的可能性。提取 DNA 过程中所用到的试剂和器材要通过高压烤干等办法进行无核酸酶化处理。要用新鲜样品或液氮冷冻-70 度保存的样品。这样通过降低内切酶的活性 DNA 的降解。

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问移液枪里密封圈是什么材质的？

天一湖医者

NBR丁腈橡胶密封圈，HNBR氢化丁腈橡胶密封圈，SIL硅橡胶密封圈，

3 回答78 围观

问磁珠法提取动物组织DNA，晾干时加热效果大吗？

Eason老歌迷

磁珠粒径小，磁含量少；磁性弱，亲水性不够；解决方案：筛选、替换匹配的磁珠。磁性分离器磁场弱，吸磁效果不理想；解决方案：选择高磁性分离设备，或增加磁吸时间。由于裂解不完全，导致样本黏度过大；样品裂解后，释放蛋白、其他杂质将磁珠紧紧包裹，影响磁吸效果。

3 回答183 围观

问请问用trizol提取的DNA可以用于表观修饰的实验吗？（如甲基化、CHIP等）

Guoood

可以使用传统trizol 法提取DNA进行甲基化等表观遗传实验，用试剂盒纯度和浓度反而不如trizol 法

5 回答193 围观

问如何在核酸扩增中减少污染现象？

迟C迟

样本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染。 PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。PCR扩增产物污染：这是PCR反应

3 回答117 围观

问我合成了一段序列，公司送来了液体状态的质粒，我做了转化，两天才长出来一个菌落，这个正常吗？

汤姆卜丽波

测一下质粒浓度，然后估计是抗性平板没选择对。

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问琼脂糖凝胶电泳冰上进行是不是可以防止电泳缓冲液过热导致的条带拖尾？

迟C迟

琼脂糖凝胶电泳没必要在冰上进行，只要样品没问题，没降解没污染，一般条带也不会拖尾。

5 回答215 围观

问请问超声随机切断DNA为什么被淘汰了？有什么弊端吗？现在这个微球菌核酸酶又有什么优点呢？

Eason老歌迷

你都说了，超声是随机切断，那肯定，没有酶切法好。它一个随机切断，没有确定性，一个是酶切，有固定位点。

3 回答242 围观

问分子克隆实验中出现很少或者没有转化子的原因是什么？

迟C迟

考虑以下几个原因：1、抗生素有没有用错，检查载体抗性。2、转化过程是否成功，电激转化还是化学转化，转化条件是否正确。3、感受态细胞是否可用，有没有低温保存，是否在操作过程中失活，实在不行建议买商业化感受态细胞。

4 回答286 围观

问磁珠法核酸DNA提取里常用的磁珠有羧基和羟基磁珠，两个有什么区别吗？

bamboopiggy

多亏你问这个问题，我才能学到：常用核酸提取结合液，PuriMag Si-OH磁珠和PuriMag Si-COOH均能对核酸有效吸附。一般来说，在离液盐体系，PuriMag Si-OH磁珠对核酸吸附效果相对较优；在PEG体系，PuriMag Si-COOH对DNA和RNA吸附效果相对较好。不同尺寸磁珠，悬浮差异明显，尺寸越小悬浮性越好，但磁响应会减弱。一般用于核酸含量较低的小样本，选用悬浮性好的磁珠

3 回答1833 围观

问核酸电泳出现这种弥散条带是什么原因

未来9

PCR条带弥散原因 1、 PCR 体系中存在污染 2、电泳槽中电泳缓冲液不净 3、电压不稳定 4、如果 PCR 的模板是经过酒精提取的质粒等相关 DNA,则酒精没有除净 5、退火时间过长或过短

5 回答2079 围观

问pcr产物进行琼脂糖凝胶电泳后可以不在凝胶成像仪紫外灯下切胶吗？

bamboopiggy

可以，你可以放个尺子，标记好位置，关了紫外切。

4 回答155 围观

问扩增得到的DNA条带弥散，是引物问题吗

Wuwuy

扩增得到的DNA条带弥散，是引物问题吗？考虑是不是跑完的胶在室温放了很久，或者4度过夜再拍的，一般这种情况拍下来是会弥散的。

6 回答167 围观

问设计引物的小技巧除了从TM值，GC含量，专一性（基因特定区域）考虑，还有别的吗

bamboopiggy

看你的目的了，如果是realimte的引物，还需要跨内含子。普通pcr的话，还要看酶切位点。

3 回答119 围观

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