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科研学霸天团,48小时有问必答
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筛选稳转细胞系用质粒还是慢病毒
府宅
1安全性高:由于慢病毒剔除毒性基因,目前实验未发现致病性,已被用于CAR-T治疗于人体;2 表达时间长:慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上,可实现目的基因长时间稳定的表达,不随着细胞分裂传代而丢失,是细胞实验的首选;3 免疫原性低: 直接注射活体组织不易造成免疫反应,适用于动物实验。
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求助 为什么我1000bp的条带pcr产物跑胶跑到了250的位置,之前跑都是正常的
n0y0j7
和之前肯定有不一样的地方,pcr试剂,引物,模板其中总有弄错的
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琼脂糖凝胶电泳结果求助
bamboopiggy
你是用kit提完质粒才酶切的?还是直接用菌体,粗提一下就酶切的?感觉是质粒酶切产生的杂质。
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求助:把目的基因连接PET32a的质粒转化入BL21中,有单菌落,但是摇不起来是怎么回事呀
爱吃水稻的小呆瓜
1.检查抗生素有没有弄错;2.看一下这个质粒是多大,目的基因是多大,如果相对比较长的话,长的会比较慢,我之前一个8k的载体,连了一个11k的片段,长了三天才有;3.摇床的频率和温度是不是对的,有些菌要左右晃,有些要转圈晃
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用lipo3000包病毒,把AB液混合之后才想起来加包装质粒,能包成功吗
balalaLy
不一定,病毒包装的过程步骤太多,影响因素太多,所以建议还是按照常规的步骤来,不然到时结果不行还得排除各种原因
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求助 BCA测蛋白浓度样品加多了有影响吗
whilt-shirt
这个不影响,结果是直接能用的。
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外源基因插入质粒实验
bamboopiggy
不是吧,太短了也不好,并且太短了,可以直接合成。
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ot-1小鼠有没有pcr鉴定纯合和杂合的引物?
bamboopiggy
这个小鼠是transgenic小鼠,没法鉴定杂合纯和,只能鉴定有没有,但是如果你有的小鼠配到一起,然后得到的小鼠再跟wt鼠配,得到的小鼠都是杂合子的话,可以间接认为小鼠是纯合的。
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请问有没有什么好方法能让磁珠在裂解液里面待的更久
bamboopiggy
可是试着调整裂解液和缓冲体系的PH,来确保磁珠的稳定性。
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关于PLKO.1测序
balalaLy
多挑几个菌落试试,我试过一个板反复测了几次,最后才测成功
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菌落总RNA提取
Topmicro
手提不行的话就买个试剂盒试试,如果是因为乳杆不好破壁导致没提取出来的话,液氮研磨可以解决问题。
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Plo和Laminin包被板子回收几次呀?
冷泉港蛋白
问题1.板子不能二次使用的原因:首先看下贴壁的原理,板子—Laminin—细胞,类似三明治结构,培养过后用胰蛋白酶消化,Laminin蛋白就被降解了,就不存在Laminin了。所以就不能二次了 问题2.可以通过elisa测定Laminin的浓度。 问题3.理论上可以铺到新板子就行贴壁生长。 了解了细胞贴壁培养的原理(板子只能用一次)就没有问题3了
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求助帖:slot blot 和dot blot的区别和原理
Eason老歌迷
斑点杂交dot blot是指将待测的DNA变性后点加在硝酸纤维素膜(或尼龙膜、NC膜)上,用已标记的探针进行杂交,洗膜(除去未接合的探针),放射自显影,判断是否有杂交及其杂交强度,主要用于基因缺失或拷贝数改变的检测。狭缝斑点slot blot,也是广义dot blot的一种。
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转染两个重链质粒进细胞会怎样?
Eason老歌迷
两种质粒混了没有影响。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,两种质粒混了没有影响,只是不相容。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,当两种质粒同时导入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争。在一些细胞中,一种质粒占优势,而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后,占少数的质粒将会丢失,因而在细胞后代中只有两种质粒的一种,这种现象称质粒
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请问,一个质粒里有2个CMV启动子,那它后面的基因都可以表达吗?
bamboopiggy
对都会表达,但是我感觉其中一个的cmv启动子可能在抗性基因上。
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小鼠空肠Il-1β的表达情况
Eason老歌迷
可能有几个原因,一个是你的上样量的问题,二个是你的上样顺序有没有错误,三个是你的模型是否成功,四个是你的实验次数,可以做三个重复看看情况。
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求助各位大佬,纯蛋白过离子交换柱前平衡柱子时为什么要用高低盐平衡?为什么要降盐啊?
Eason老歌迷
有利于纯化啊。不同的离子团跟柱胶的结合能力不同,盐梯度洗脱可以使结合能力不同的离子团逐步洗脱,常用于不同蛋白的分离纯化。
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请问细胞杀伤肿瘤效果,除了用荧光素酶检测荧光强度,还需要用LDH和CCK8来检测杀伤效果吗?
bamboopiggy
有一个能说明问题就好。但是多种方法说明一个问题,更solid
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求助!!!免疫共沉淀洗珠子时的去污剂SDS浓度范围
balalaLy
我用的buffer的配方一种是1%NP40+0.1%SDS或者只有1%NP40
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求助各位大神,帮我看看qpcr扩增曲线太奇怪了,有负的荧光信号,但是溶解曲线是好的,
Eason老歌迷
你这是有溶解曲线,无扩增曲线。可能是反应程序问题,扩增阶段未收集荧光信号。建议你检查程序设置。
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