求助：把目的基因连接PET32a的质粒转化入BL21中，有单菌落，但是摇不起来是怎么回事呀

小熊小熊心情好

2022-08-01

我去年就将连接了pet32a的目的基因导入了BL21中，可以表达出蛋白，但是等今年想重新表达蛋白的时候，怎么样都诱导不出来了。无奈重新将质粒导入BL21中，三个板子只涨了两个菌，菌落PCR都有条带，而且很亮，但是怎么都摇不浑浊，培养基非常清澈，请问是啥原因啊，有解决的办法吗？

爱吃水稻的小呆瓜

2022-08-07

有帮助

1.检查抗生素有没有弄错；

2.看一下这个质粒是多大，目的基因是多大，如果相对比较长的话，长的会比较慢，我之前一个8k的载体，连了一个11k的片段，长了三天才有；

3.摇床的频率和温度是不是对的，有些菌要左右晃，有些要转圈晃

bamboopiggy

2022-08-01

有帮助

你没有加错抗生素吧？这个最怕的就是加错了抗生素。

dxy_gwrp7ndq

2022-08-01

有帮助

1、挑取的单克隆是空的大肠杆菌；

2、摇床温控实效，虽然摇床上温度显示为37度，但实际上可能不止37度，你最好用温度计测量一下工作时摇床的温度。

另外，你可以取试管中的菌液划平板后再挑单菌落，接种后再摇菌看看。

府宅

2022-08-01

有帮助

摇的时间太短了，幅度调大，多摇一会儿

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