目的蛋白洗脱不下来或洗脱率低是什么原因导致的？

洗脱剂种类，体积选用不足，pH条件等不适当。

可能原因：1.洗脱条件太温和；2.蛋白在柱子中沉淀；3.非特异性的疏水或者其他作用；4.蛋白和柱子接触时间过长。

His标签蛋白挂柱后洗脱不掉可能的原因及建议：

洗脱条件太温和：可以通过降低pH和增加咪唑浓度找出最佳的洗脱条件。但PH低于3.5可能会导致Ni2+脱落，这时候就需要采用咪唑竞争性洗脱法。

蛋白沉淀在柱子上：尝试减少上样量和孵育时间，避免蛋白沉淀。

非特异性吸附：添加非离子去污剂洗脱缓冲液或增加NaCl的浓度。

（1）洗脱缓冲液的体积太少

增加洗脱缓冲液的体积

（2）洗脱的时间不够

增加洗脱缓冲液与磁珠反应的时间

（3）洗脱缓冲液中谷胱甘肽浓度太低

增加洗脱缓冲液中谷胱甘肽的浓度

（4）洗脱缓冲液的pH过低

增加洗脱缓冲液的pH值。将 pH 增加到 8-9，会增强洗脱而不用提高洗脱所用 GSH 的浓度。

（5）洗脱缓冲液的离子强度过低

增加洗脱缓冲液中的离子强度，在洗脱缓冲液中加入0.1~0.2M的氯化钠

（6）洗脱缓冲液中的谷胱甘肽被氧化

使用新鲜配制的洗脱缓冲液

可能由以下一些原因导致：

离子交换柱等柱子选择不当：离子交换柱可以选择不同的离子交换介质和不同的离子强度，如果选择不当，可能会影响蛋白的洗脱。例如，如果离子交换柱选择的是强离子交换介质，而目标蛋白质带有相对较弱的负电荷，则可能会导致目的蛋白无法与柱子结合或难以从柱子中洗脱出来。

pH条件不当：pH值对蛋白质的结构和功能有很大影响，如果选择的洗脱缓冲液的pH值不适合目标蛋白，可能会影响蛋白的洗脱。例如，如果目标蛋白在酸性条件下不稳定，则不宜选择酸性洗脱缓冲液，否则可能会导致蛋白的失活或降解。

蛋白质结构不稳定：有些蛋白质的结构比较不稳定，容易聚集或产生凝集体，这种情况下可能会影响蛋白的洗脱。例如，一些多肽激素在高浓度时容易形成凝集体，导致难以从柱子中洗脱出来。

洗脱缓冲液的浓度或成分不当：洗脱缓冲液的浓度或成分对蛋白的洗脱也有很大影响。如果洗脱缓冲液的浓度过低或成分不当，则可能会导致目标蛋白难以从柱子中洗脱出来。

洗脱条件不当：洗脱条件包括洗脱缓冲液的浓度、pH值、离子强度等，如果选择的洗脱条件不当，则可能会导致目标蛋白无法从柱子中洗脱出来。例如，在离子交换柱中，如果洗脱缓冲液中的离子强度过低，则可能会导致蛋白无法与柱子分离。