🔥 类器官培养

是在体外，经过 3D 培养，能够在体外模拟正常（或疾病）状态下体内器官（或组织）的三维结构和生理功能。通俗点讲，类器官是三维细胞培养物，将干细胞培养于基质胶中，在化学小分子抑制剂/激活剂、细胞因子、培养基添加剂等物质作用下经过培养得到的相应器官类似的组织结构。

肿瘤类器官先前已被证明可以对衍生它们的肿瘤进行表型分析，从而允许体外药物反应与原始肿瘤中存在的遗传改变相关联。

是在体外，经过 3D 培养，能够在体外模拟正常（或疾病）状态下体内器官（或组织）的三维结构和生理功能。通俗点讲，类器官是三维细胞培养物，将干细胞培养于基质胶中，在化学小分子抑制剂/激活剂、细胞因子、培养基添加剂等物质作用下经过培养得到的相应器官类似的组织结构。

1、组织样本要求样本类型：适用于新鲜的手术或穿刺组织或积液，推荐用于培养的实体肿瘤组织质量为0.5～1g，积液体积为 500ml 以上，肿瘤组织比例含量为 50% 以上。样本保存：样本采集后在 2～8℃ 条件下保存于类器官培养专用组织保存液中，为保证初始细胞活性，建议样本离体后于 24 小时内处理。2、组织样本预处理组织清洗：将组织转移至无菌的 50ml 离心管中，加入 20～30ml 无菌 D-

1、将细胞悬液与基质胶按照一定的比例充分混匀，通常基质胶的使用浓度 ＞70%（本步骤操作应在冰上进行，避免基质胶凝固）。用预冷的枪头吸取 50 μl 含基质胶的细胞悬液，接种至 37℃ 预热的培养皿中，避免产生气泡。2、将接种完细胞的培养皿放入 CO2 培养箱内（37℃，5% 的 CO2 浓度）静置 2min，轻晃胶滴无明显流动后小心倒扣，待其充分凝固（约 10~15min）。待胶滴充分凝固后，向

类器官传代（1）轻轻吸去培养基，各孔加入500μl凝胶消化液（以24孔培养板为例）；（2）使用凝胶消化液润湿1 ml的枪头尖端，并用该枪头尖端将步骤（1）中的胶滴从皿底彻底刮除。用移液器反复吹打，吹打时避免产生气泡，将胶滴吹散，放入冰盒上消化20 min；Tips：建议尽可能将胶滴吹散，避免影响消化效率。使用移液器吹打时，应避免移液枪头尖端接触到皿底。（3）消化好的细胞悬液收集到 15 ml 无菌

1、取材将小鼠断颈处死后，放在 75% 乙醇中浸泡 2 次，转移至生物安全柜；小鼠腹部向上摆放，用镊子轻轻夹起小鼠生殖口上 1cm 处皮毛，用剪刀以 V 形斜纵向剪开皮毛；更换镊子和剪刀，轻轻夹起腹膜以同样方式剪开腹膜，在小鼠左侧肝脏下找到小鼠呈荷包状的胃；取小鼠小肠，胃后连着肠，取近胃端 10～15cm 的小肠部分，置于盛有冰 D-PBS 的 100mm 培养皿中， 使用镊子去除肠道外部的膜、血

1.类器官收集（1）轻轻吸去培养基，各孔加入 500μl 凝胶消化液（以 24 孔培养板为例）；（2）使用凝胶消化液润湿 1 ml 的枪头尖端，并用该枪头尖端将步骤（1）中的胶滴从皿底彻底刮除。用移液器反复吹打，吹打时避免产生气泡，将胶滴吹散，放入冰盒上消化 20 min；Tips：建议尽可能将胶滴吹散，避免影响消化效率。使用移液器吹打时，应避免移液枪头尖端接触到皿底。（3）固定：弃去上层培养基，

1、取材将小鼠断颈处死后，放在 75% 乙醇中浸泡 2 次， 转移至生物安全柜；小鼠腹部向上摆放，用镊子轻轻夹起小鼠生殖口上 1cm 处皮毛，用剪刀以 V 形斜纵向剪开皮毛；更换镊子和剪刀， 轻轻夹起腹膜以同样方式剪开腹膜。取近肛门端大约 10cm，去除盲肠部分，置于盛有冰 D-PBS 的 60mm 培养皿中，使用镊子去除肠道外部的膜、血管和脂肪。用注射器从结肠一端注入 D-PBS 反复冲洗，至内

1、取材将小鼠断颈处死后，放在 75% 乙醇中浸泡 2 次，转移至生物安全柜；小鼠腹部向上摆放，用镊子轻轻夹起小鼠生殖口上 1cm 处皮毛，用剪刀以 V 形斜纵向剪开皮毛；更换镊子和剪刀，轻轻夹起腹膜以同样方式剪开腹膜，在小鼠左侧肝脏下找到小鼠呈荷包状的胃，将胃取出，减去不必要的筋膜部分；用 D-PBS 将其涮洗 3 次，沿胃半径较大的弧侧用剪刀剪开，用预冷的 D-PBS 充分涮洗去除胃里面杂质后

诱导拟胚体（EB）形成（1~2h）1、当人多能性干细胞 ESCs/iPSCs 在 6 孔板中长到融合度为 70%～80% 时用于诱导 EB，通常每个六孔板孔的细胞可用于诱导一整个 96 孔板。对于无饲养层培养的 ESCs/iPSCs：用 1ml 的无钙镁的 D-PBS 洗涤细胞后，向每孔中加入 600μl 的含 0.5mM 的 EDTA 的无钙镁的 D-PBS 溶液。培养箱孵育 4min；轻柔吸出