原代组织样本送样要求与处理方法

新鲜手术或穿刺组织，PBS，Hank's 平衡盐溶液，Rinsing Solution，涡旋振荡仪，眼科剪，移液器，细胞筛，离心机

1、组织样本要求

样本类型：适用于新鲜的手术或穿刺组织或积液，推荐用于培养的实体肿瘤组织质量为0.5～1g，积液体积为 500ml 以上，肿瘤组织比例含量为 50% 以上。

样本保存：样本采集后在 2～8℃ 条件下保存于类器官培养专用组织保存液中，为保证初始细胞活性，建议样本离体后于 24 小时内处理。

2、组织样本预处理

组织清洗：将组织转移至无菌的 50ml 离心管中，加入 20～30ml 无菌 D-PBS，通过手工颠倒或涡旋振荡仪进行清洗 3～5 次。

组织剪切：取 60 mm 无菌培养皿放置于冰盒上，将清洗好的样本转移至培养皿中，使用无菌剪刀将组织剪至约 1 mm³ 小块。

组织消化：消化至组织松散，大部分组织碎片能够通过 1ml 移液器吸头时结束。不同的组织所需消化液的种类不同，建议初次消化时，进行消化液种类、用量及消化时间的摸索优化。消化期间每隔 2min 吹打组织促进消化，为减少细胞损失，可以预先将移液器吸头及离心管等耗材用 Rinsing Solution 进行润洗。组织消化完成后，向悬液中加入 5ml 无菌 Hank's 平衡盐溶液或者 D-PBS 终止消化，rcf 200-300g 离心 3min 后弃去上清，反复清洗 2 次后取沉淀备用。

组织过滤：在细胞团沉淀中加入 5ml Advanced DMEM/F-12 进行重悬，然后使用 100 μm 细胞筛网进行过滤，收集滤液至 50ml 无菌离心管中。

• 由于肿瘤的复杂性，所采集的临床样本往往会混有网膜、脂肪组织等，不同样本组织混杂程度不同，在取样与培养过程中，应剔除与培养无关的组织，富集肿瘤细胞；
• 随着离体时间延长，样本的新鲜程度不断降低，样本内较多不稳定活性生物分子会逐渐降解，可能会导致后续培养结果不理想。因此，保证样本的新鲜度对培养成功至关重要。