其他实验

荧光原位杂交（FISH)需要核酸探针，包括直接用荧光素标记或者可以间接与荧光素相连接的脱氧核糖核酸（DNA)、核糖核酸（RNA)或核酸类似物。通过探针核苷酸与靶序列的核苷酸互补配对，使得FISH分析具有特异性。核酸连接的荧光基团使得在荧光显微镜下可观察到细胞结构中的同源区域。摄影照相或电子照相可获得永久性荧光染色图像，而且后者可以进行探针荧光的定量测定。

基 因 枪 技 术 是 一 种 快 速 而 又 简 单 地 将 基 因 运 送 到 细 胞 内 的 技 术 。这 种 技 术 有 很 多 优 点 ：可以直接输送质粒，不必像一些病毒载体系统那样构建复杂的生物载体。理论上，用基因枪技术能够将D N A 输送到任何细胞。 D N A 能穿透细胞壁、细胞膜、角质层或者其他保护性结构，而且，输送不受细胞表面受体或分子的限制。 作者：T.弗里德曼等,译者：殷

主 要 描 述 那 些 用 于 从 cDNA克 隆 中 恢 复 出 具 感 染 能 力 的 流 感 病 毒 的 方 法 。这 些 技 术 广 泛 地 应 用 于 外 源 基 因 的 整 合 和 表 达 、候 选 疫 苗 的 研 制 和 流 感 病 毒 复 制 的 研 究 。使 用 流 感 病 毒 作 为 抗 原 传 送 载 体 的 一 个 优 点 就 是 有 一 个 巨 大的 不 同 抗 原 的

S T A R 系 统 （6 个组氨酸标签和重新靶向）运用一个假受体和一个病毒的标签使全部再结合的病毒能被拯救和扩增，这些病毒已不能结合到天然的麻疹病毒的受体上。本操作规程提供了如何使用这个系统的详细的指示，使用这个系统，经过简单的三步操作就能迅速地产生具有新的靶向性的病毒。首先，编码靶向配体的c D N A 被克隆进一个嵌合H 蛋白的穿梭载体，这个载体能编码一个C 端有6 个组氨酸的多肽标签。

H S V -I 的自然生理特点包括在神经元中建立一种终生潜伏状态，病毒基因始终是一种游离性分子。已构建了能产生完全不能复制的、无毒性的、能长期表达转基因的 H S V 载体，也构建了能在特定细胞（如癌细胞）中保持复制能力的可复制重组型基 因 H S V 载体，并被利用到多形性胶质母细胞瘤患者临床试验的I 期 和 II期。最近的研究集中在将H S V 载体用于治疗非神经系统疾病。生产用于潜伏期效能

A A V 衣壳肽展示库、易错 P C R 和 D N A 改组 。可通过自然突变和重组产生不同组织嗜性的A A V 血清型，从而将 A A V 转导到一些难感的细胞类型中去。另外，可利用血清同源体，用核衣壳移植或标记拯救技术用不同的血清型构建杂合载体。因 为 A A V 2 是了解最为透彻的血清型，这个血清型一般被用来作为构建A A V 杂合载体的模板。本章主要介绍构建具有扩大的组织嗜性的杂合A

本节提供了多种对癌症患者的血液标本的细胞进行遗传学分析的实验方法。由于研究方便，白细胞很久以来一直被用来分析染色体重组。观察到标志性重组染色体，如费城染色体（Ph 染色体）有助于诊断和后续治疗。许多肿瘤特异性的标志染色体已经在白血病中被发现，它们的发现对于在早期选择适合的治疗方案非常重要。细胞遗传学分析还用于对骨髓移植后的移植物分型。

针对病毒载体骨架编码的蛋白质的免疫反应可能发生，这就限制了体内表达转基因载体的应用。尽管如此， A d 仍然是最有效和最通用的基因传递系 统 。 这里我们讨论当前的用于构建、扩增、纯化和鉴定第一代A d 载体的方法。 作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

本试验方案描述了几种产生补体稳定的慢病毒载体的方法，这些方法是通过利用含有补体调节蛋白CD55 (降解加速因子， D A F ) 的融合包装蛋白来产生假型病毒质粒，或是采用天然的D A F 与包装蛋白共组装来产生新型的慢病毒。 作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

大多数造血细胞 ，包括造血干细胞和终末分化细胞，如初生 T 细胞和巨噬细胞，是不分化或自我更 新缓慢的。对于这些细胞，大多数非病毒或反转录病毒转染方法是不可行的。慢病毒载体适用于转染未分化的细胞以及长效维持转基因的表达。带有各种基因的慢病毒载体已成功转染许多造血细胞。慢病毒载体可用于许多转载操作，如短发夹R N A (sh R N A )和功能基因的长效表达。它们在基因治疗方面也将有很大的潜力。

基于猫免疫缺陷病毒（F IV ) 的慢病毒载体对于介 导 整 合的转基因到非分裂的人体细胞是非常有用的。本章主要描述了生产和使用新一代F I V 载体的方法，讨论了 F IV和其他慢病毒载体相比较的关键特征，并提供了大规模/小规模载体生产的详细方案。此外，最近鉴定的种属特异的反转录病毒限制因素的实际应用和非整合的F I V 载体的生成也是本章讨论的主题 作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验

反转录病毒能非常好地被用来作为基因导入的工具是因为它们有特定的生命周期和能有效整合进入靶细胞DNA的能力。反转录病毒的基因组两侧连接着两个调控区，也被称作长末端重复序列（ LTR)，具有启动子和增强子的功能并且也是整合进入宿主基因所必需的。 作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」

基因打粑技术是建立在胚胎干细胞 (embryonic stem cell， E S 细胞) 和同源重组基础上的定点改变物种遗传信息的实验手段。首先在体外利用同源重组技术获得带有预先设计突 变的 E S 细 胞 ，即中靶 E S 细胞，随后将这种遗传修饰的 E S 细胞注入囊胚，获得嵌合体 ，然后将嵌合体与野生型个体交配，若 E S 细胞已整合入生殖系，在子一代中会获得 携带一条突变染色体的杂合子个

核移植技术所依赖的理论基础是来源于同一胚胎或细胞系的所有细胞核都含有与受精卵完全相同的遗传信息，从基因组成上应该具有与受精卵一样的指导个体发育的全部潜 能 。当供体核移植到受体胞质后，供 体核会在胞质因子的作用下，发生重新编程 (reprogramming)，从而回到合子核的状态，指导重组胚发育成一完整的个体。核移植技术揭示了细胞质对细胞核的巨大影响作用，增进了对细胞分化、细胞全能性等发育生物学基

本章将主要从上述的三个方面对目前较成熟的实验方法、动物模型进行介绍。 5.1 主 要介绍向成体动物体内移植干细胞的操作方法、检测手段、评估指标等； 5.2 主要提供向 动物胚胎、囊胚中移植干细胞，构建嵌合体的实验流程、结果分析、注意事项等； 5.3 主 要针对当前干细胞治疗中评估困难的特点，重点介绍干细胞活体内示踪技术。 作者：裴雪涛,本实验来自「干细胞实验指南」

干细胞的分离纯化 作者：裴雪涛,本实验来自「干细胞实验指南」

本章所谈的技术可以在局麻下记录皮层及皮层下结构，如丘脑、基底神经节和头端脑干神经元的活动，在记录的同时，可以要求病人做不同的运动和脑力活动，并且可以让其报告脑内刺激产生的效果。 本章介绍的是获得记录和实施微刺激的技术，并假定操作者具备一定的实验动物胞外记录方法的基本知识和经验。

正电子发射断层成像（PET) 是一种在体功能性神经影像技术，可以提供多种生理学参数的三维定量图像，如血流、葡萄糖代谢率、蛋白质合成、受体密度与亲和性等 (Phelpsetal.1979,1986)。PET 也是一种无创性技术，适用于正常志愿者和病人的多项神经科学领域的研究。CT

本章旨在为那些需要自己修饰抗体的研究人员提供实践指导。内容涵盖了保留 IgG抗体其抗原结合功能的常见化学和蛋白质水解修饰方法。过于剧烈的修饰方法则因导致广泛蛋白质变性和功能失活而不在此讨论。抗体的放射性标记也不包括在本章范围内。 本章将提供典型修饰的详尽反应流程，同时也将对其基本原理加以解释，但不会涵盖全部修饰反应的方方面面。为了更加全面地理解化学和蛋白质水解修饰技术，包括放射性标记技术，推荐读者

在物理学上，任何电流都伴随产生磁场。在大脑和神经内部流动的离子流同样会产生磁场。超导量子干涉仪（superconducting quantum interference device,SQUID) 是最近 30 年发展起来的，脑磁图（magnetoencephalography,MEG) 就是通过这种高度敏感的探测器来测量头皮表面非常微弱的磁场。MEG 可以在不对大脑造成损伤的前提下记录到数千个协