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利用模块装配方法构建锌指 核酸酶以位点特异的方式操作基因组实验
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简介
同源重组是基因组操作中最精确的一种方法。作为一个工具，同源重组已经广泛地用于细菌、酵母、鼠胚胎干细胞（E S ) , 以及其他一些特殊细胞系，但在其他系统如哺乳动物体细胞遗传学上还没有得到应用。最近的研究工作表明，在哺乳动物体细胞中，双链 D N A 发生基因特异的断裂，能够引起上千倍的同源重组。目前，利用锌指核酸酶(Z F N )，能够在哺乳动物基因组中形成这种双链断裂。 Z F N 是一种人工蛋白质，由一个铸指D N A 结合结构域与一个非特异性的核酸酶结构域融合而成。本章描述如何鉴定Z F N 切割的潜在靶向，如何使 Z F N 切割该靶向位点，以及测定这些新设计的Z F N 在培养的哺乳动物细胞系统中是否有活性。
作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
来源：丁香实验
操作方法
利用模块装配方法构建 ZFN 材料 试剂 琼脂糖凝胶（2.5%) 牛小肠碱性磷酸酯酶 d N T P (每种10 mmol/L ) 转化用大肠杆菌 MgCl2 (50mmol/L ) 质粒： pBluescript (p B S --Z F ) 和 p c D N A 6 (Invitrogen) P C R 片段纯化试剂盒 10 X 聚合酶缓冲液
利 用 GFP 报道系统测定新三指 ZFN利 用 GFP 报道系统测定新三指 ZFN 材料 试剂 转化用大肠杆菌 F A C S 缓冲液 磷酸盐缓冲液（P B S ) 2 % 小牛血清 1 mmol / L E D T A 0.1 % 叠氮化钠 G 4 1 8 H E K -293 细胞 M A C S 缓冲液 P B S 2 % 小牛血清 1 mmol / L E D T A
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