细胞型操作实验

其他实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

根据交配型的稳定性可以将菌株分为两组，即异宗配合型（heterothallic) 与同宗配合型（homothallic)。异宗配合型菌株的交配型是稳定的，而同宗配合型单倍体菌株的交配型能够发生交配型的改变。所以，一个来自同宗配合型细胞的菌落将同时含有 a 和《细胞以及 a 和 a 细胞交配产生的二倍体细胞。

来源：丁香实验

操作方法

采用 HO 产生二倍体

第1天把菌株9-1在YPD平板上划单克隆，于30°C下培养第3天上午，把菌株9-1的菌落接种到5mlYPD培养液中，于30°C下培养。将YPD平板置于4°C下储存以备第13天使用。第4天按照“技术和方案1，酵母的高效转化”将未切的质粒PCY204(来自指导老师）转化到菌株9-1。记住设置一个不含DNA的转化对照。每个转化液取20ul涂于SCura平板，在30°C下培养。不含D

用两步基因置换法进行交配型转换

第 1 天把菌株 9-4 和 9-5 在 YPD 平板上划单克隆，于 30°C 下培养。1、2、3、4 组使用菌株 9-4;5、6、7、8 组使用菌株 9-5。第 3 天上午，把菌株 9-4 和 9-5 的单菌落接种到 5 mlYPD 培养液中，于 30°C 下培养。将 YPD 平板置于 4°C 下储存以备第 13 天使用。第 4 天按照「技术和方案 1，酵母的高效转化」转化菌