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病毒包装与感染实验宝典

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问腺病毒感染细胞检不出来

huarenqiang5

考虑问题出在包装环节上，腺病毒包装设计到好多方面。1. 293细胞是否为低代数；2.Pac I酶切是否完全；3. 酶切后是否去除内毒素；4. 助燃效率是否高；建议你注意以上几个环节，一般可以解决。

3 回答668 围观

问利用腺病毒过表达载体时，怎样控制用量，腺病毒本身会影响细胞表型吗？

bamboopiggy

腺病毒会，现在一般用腺相关病毒的比较多，腺病毒用的少了。

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问请教大鼠鞘内腺相关病毒注射怎么操作呢？是需要鞘内置管还是可以像小鼠一样定位注射？

土井挞克树

如果需要联系注射建议置管。如果是单次注射可以不置管

3 回答416 围观

问求助：包装腺相关病毒

Dr_劉医生

不是必须的，可以用HEK293；先是用常规的方法培养HEK293细胞，传代后24 h后，用购买的Lpotectamin 2000协助重构的质pAAV—MCS及AAV HelpeFreesystem中的其他两种辅助质粒pAAV—RC及pHelper共转染HEK293细胞，培养72 h后，用X—gal染色系统检测质粒转染的效果。用物理方法破碎细胞后，提取病毒悬液，用分光光度仪检测260nm的A值来评价

3 回答613 围观

问AAV病毒用于细胞实验需要注意哪些问题？

sswei

AAV病毒用于细胞实验关键注意事项1. 启动子的选择。是选择广泛性启动子还是特异性启动子。相比于血清型的组织特异性，特异性启动子可实现细胞的特异性，因此对特异性要求较高的研究，可以选择某种细胞特异性表达的启动子。2. 血清型的选择。AAV的血清型主要由AAV衣壳蛋白的结构所决定，不同的衣壳蛋白结构识别不同的细胞表面受体，因此血清型的选择会影响AAV的感染效率、组织亲和性、和开始表达的时间。3. 病

3 回答782 围观

问为何有时病毒在体实验表达效率不理想？

sswei

可能的原因为目的细胞不易感，属于难感染细胞，建议适当加大病毒量再尝试。

3 回答324 围观

问AAV病毒应该如何稀释保存？

dxyc42u

AAV病毒用培养液稀释后放四度保存，可以保存一周

3 回答1959 围观

问AAV注射小鼠，多少病毒量才够呢？

huarenqiang5

根据注射部位的不同而剂量及血清型也不相同:1.肝脏:注射部位常选择门静脉、外周静脉和尾静脉。注射病毒滴度一般选择 8×10^10-2×10^12(GC/kg)（人、灵长类）；1×10^11 GC/只鼠，稀释成 50-100 μl 进行尾静脉注射。2.心脏和动脉:常用血清型有：AAV1、AAV6、AAV8 和 AAV9 。常见的注射部位为冠状动脉、主动脉、心肌和尾静脉。注射病毒滴度为 1.9×10^

3 回答4686 围观

问用AAV可以实现组织特异性的感染吗？

dxyc42u

AAV一般很难实现组织特异性感染的

3 回答305 围观

问哪些实验可以选择AAV病毒？

dxyc42u

一般对于一些难转染细胞的实验选择AAV病毒

3 回答386 围观

问AAV注射后如何检测目的基因过表达？

dxyc42u

检测目的基因表达一般选择qpcr或者wb实验

3 回答979 围观

问AAV可以通过哪些方法注射到动物体内进行感染？

sswei

AAV动物实验注射方式可分为系统性注射和原位注射两大类。系统性注射中AAV常见的注射方式有尾静脉注射、眶后静脉窦注射、腹腔注射、肌肉注射、面静脉注射、皮内注射等。原位注射也就是局部注射，根据实验需要在不同的部位进行注射，更加适合局部组织的研究。常见的注射方式有脑立体定位注射（神经）、玻璃体注射（眼睛）、心肌注射（心脏）、肝内注射丶肝门静脉注射等，局部注射的优点在于可实现靶组织的特异性感染，且所需的

4 回答536 围观

问AAV注射动物后多久可以观察病毒感染效果？

dxyc42u

看情况，有的七八天就看见效果了，有的半个月才能看见效果

3 回答720 围观

问腺相关病毒产品的安全性如何？

dxyc42u

只要严格规范操作时很安全的。。

3 回答274 围观

问腺相关病毒会整合到细胞基因组上吗？

dxyc42u

腺病毒就是整合到细胞基因组上的

3 回答404 围观

问腺病毒可以扩增，会不会比较危险？

dxyc42u

有一定的风险，所以操作时戴两层手套，不要打开通风厨

3 回答453 围观

问腺病毒不够用？需要重新包毒吗？

huarenqiang5

这个建议重新进行包装比较可靠。

4 回答284 围观

问慢病毒感染效率低是否可以二次感染呢？

dxyc42u

对于难转染细胞可以使用二次转染的

3 回答1170 围观

问如何提高病毒对细胞的感染效率？

huarenqiang5

1.建议提前一天将细胞种植在24孔板中，以感染时细胞融合度在50%左右为宜。2.适当减少感染时的细胞培养基量可以增加感染效率，但也可能增加细胞毒性。如出现细胞毒性可增加培养基量或更换培养基。

3 回答656 围观

问要曝光很长时间才能观察到荧光，原因是什么？

谦谦千千

可能是染的荧光比较弱，表达量低；也有可能是在染荧光后没有使用荧光淬灭剂，荧光淬灭了；还有可能是拍的时间太久，导致荧光淬灭。

4 回答483 围观

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