AAV注射小鼠，多少病毒量才够呢？

根据注射部位的不同而剂量及血清型也不相同:

1.肝脏:注射部位常选择门静脉、外周静脉和尾静脉。注射病毒滴度一般选择 8×10^10-2×10^12(GC/kg)（人、灵长类）；1×10^11 GC/只鼠，稀释成 50-100 μl 进行尾静脉注射。

2.心脏和动脉:常用血清型有：AAV1、AAV6、AAV8 和 AAV9 。常见的注射部位为冠状动脉、主动脉、心肌和尾静脉。注射病毒滴度为 1.9×10^11-10^12 GC/ml，稀释成 100 μl- 250 μl注射；但是对于心脏原点注射而言，常采用 10^10 GC/ml 病毒滴度，稀释成 20 μl 使用。

3.肺脏:常用血清型有 AAV1、AAV2、AAV5、AAV6 和 AAV9。常见的注射方式有滴鼻、雾化吸入或气管内注射，注射病毒滴度为 10^12 GC/ml ，稀释成 3 μl。

4.肾脏:常用血清型有 AAV2、AAV8 和 AAV9。注射病毒的滴度一般选择 1-5×10^11 GC/ml，稀释成 50-200 μl 注射。常见的注射部位有肾动脉、肾静脉和左髂脉、腹主动脉。

5.肌肉:常用血清型有 AAV2、AAV8 和 AAV9。对不同年龄阶段的鼠，注射剂量有所不同：幼鼠选择的病毒量为 7×10^10-1.2×10^11 GC/g；成年鼠选择的病毒量为 3.5 ×10^11-7×10^12 GC/只。

6.肠:常用血清型有 AAV1、AAV2 和 AAV5。常见的注射方式有口服、灌肠、腹腔注射、肠系膜动脉注射。一般选择注射滴度 1×10^11 GC/ml ,稀释成 100 μl（PBS或者稀释液稀释）使用。

1、肠神经系统（Enteric Nervous System ENS），是由神经细胞组成的复杂网络，遍布整个肠胃消化管道。其神经元的数量和脊髓相当（约1亿个神经细胞）。该神经系统在人体躯干下部，属于迷走神经，以薄层的形式分布于消化肌之间，调节消化。常用 AAV5、AAV6、AAV8 和 AAV9.AAV6 对肠神经胶质和神经元有一定的靶向性。注射部位可以选择降结肠，注射量和滴度： 滴度为 1.3 × 1012 GC/ml的病毒注射 5 μl 即可，检测时间：注射后 2 周开始表达，2-6周均有检测。

2、脑组织常见的血清型为 AAV9,注射方法：左心室注射或者侧脑室注射，注射剂量和滴度：选择滴度为 0.5–4.0 × 1011 GC/ml 的病毒液，稀释成 100 μl ,注射两周之后（14d）开始检测。

视网膜

视网膜组织常用血清型有 AAV1、AAV2 和 AAV5.视网膜组织由于其特殊性，因而有自身的特点：注射成功率 20-30%,容易造成视网膜炎症和损伤，注射完需要使用 1% 阿托品（和少量新霉素、多粘菌素B硫酸盐和地塞米松眼膏施用于眼睛，延长瞳孔扩张时间，减少腺体分泌，减少炎症反应），连续使用 3-5 d.其常用的注射量为 0.5 μl ,病毒滴度 1.5x107 GC/ml.常用注射方法：视网膜下注射或者玻璃体注射。

肝脏

对肝脏而言，主要的腺相关病毒载体有：AAV2、AAV5、AAV7 和 AAV8,其中 AAV7 和 AAV8 的效率是 AAV2 的 10-100 倍。注射部位常选择门静脉、外周静脉和尾静脉。注射病毒滴度一般选择 8×1010-2×1012（GC/kg）（人、灵长类）；1×1011 GC/只鼠，稀释成 50-100 μl 进行尾静脉注射；注射后 2 周之后可以检测。

心脏和动脉

对心脏和动脉而言，常用载体有：AAV1、AAV6、AAV8 和 AAV9.其中 AAV2、AAV5、AAV7 也可以使用，但是表达比较慢，3 个月后表达量才能与 AAV1、AAV6 表达量相当。

所有血清型中 AAV8 和 AAV9 最有效，2 个月左右其表达量达到最高。常见的注射部位为冠状动脉、主动脉、心肌和尾静脉。注射病毒滴度为 1.9×1011-1012 GC/ml,稀释成 100μl-250μl（大鼠剂量稍高于小鼠）注射；但是对于心脏原点注射而言，常采用 1010 GC/ml 病毒滴度，稀释成 20 μl 使用。检测时间：一般在 2 周之后可以检测。

影响AAV注射总量的因素很多，比较重要的有血清型、目标组织类型、注射方式（局部or全身）、动物模型（如大鼠or小鼠）等，对于有文献报道的，可参考文献的注射方法，最好设置几个不同的梯度。例如AAV9感染小鼠心脏组织（心肌细胞），可采用尾静脉注射也可采用心肌多点注射的方式，尾静脉注射推荐1011 vg/mL，100μL；原点注射则推荐10^12 vg/mL，20 μL/点。