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RNA 提取与检测

专题56 内容 443 订阅

从果蝇胚胎中提取总 RNA 或 poIy(A) +RNA

RNA 实验技术手册（分子克隆-实验指南系列）

实验概况收录 1 操作方法 · 3 相关问答 · 3 相关文章

纯化 RNA 实验

本实验来源「细胞实验指南」黄培堂等译。

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RNA提取

获得高质量和完整的 RNA 是很多分子生物学实验中最重要的一步，当前应用最多的是 Trizol/氯仿萃取的方法。

操作方法所属实验：RNA提取及检测

🔥RNA pull-down

RNA 与蛋白质相互作用是细胞生理过程中的重要步骤，其中 RNA pull-down 实验用于研究 RNA 分子与蛋白质之间的相互作用关系。该方法利用特定标记的 RNA 探针（biotinylated RNA）结合目标蛋白质，形成 RNA-蛋白质复合物，并通过亲和纯化形式富集出 RNA 与蛋白质复合物，洗脱实验后可以通过 Western blot 或质谱等技术鉴定 RNA 与蛋白质的结合情况。

操作方法所属实验：pull-down

问如何灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解？

丁香实验

以下3个方法均可有效使内源RNA酶失活：（1）用含离液（如胍盐）的细胞裂解液收获样品，并立即匀浆。（2）用液氮瞬间冻结样品。值得特别注意的是：组织块必须保证足够小，在浸入液氮的瞬间就能冻结，以确保瞬间令RNA酶失活（3）立即将样品置于RNAlater? Tissue Collection：RNA Stabilization Solution中。它是一种水相、无毒的收集试剂，能立即稳定并保护完整、未冻结的组织和细胞样品中的RNA。关键要点是组织样品切片一定要够薄（<0.5 cm

实验问答1 回答1413 围观

问RNA-FISH

土井挞克树

一般长链可剪切位点比较多，短链灵敏度高

实验问答1 回答795 围观

micro RNA(miRNA)

相关专题 miRNA RNA一度被认为仅仅是DNA和蛋白质之间的“过渡”，但越来越多的证据清楚的表明，RNA在生命的进程中扮演的角色远比RNA我们早前设想的更为重要。 RNA干扰（RNA interference）的发现使得人们对RNA调控基因表达的功能有了全新的认识，更因为可以简化替代基因敲除而成为研究基因功能的有力工具，因此格外引人注意，在2002年度Science评选的10大科学成就中RNAi名列榜首。随着对小分子RNA研究的不断深入，研究人员开始认识到：小分子RNA的世界一点都不小

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动物组织RNA的提取

实验目的：掌握由动物组织中提取总RNA的方法实验原理：Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液，其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性，随后加入氯仿，酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同，造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中，RNA则分布在上层的水相中，最后用异丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗涤沉淀，这样就可以得到比较纯净的总RNA. 实验步骤： ① 先在研钵中加入液氮，再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末，用液氮预冷的药匙取50～

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RNA 干涉实验

RNA 干涉（RNA1）是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。

实验概况收录 4 操作方法 · 2 相关问答 · 3 相关文章

用T4 RNA 连接酶连接 RNA 分子

T4RNA 连接酶已经用来生成很多位点特异修饰的 RNA，尤其是寡核苷酸修饰和用反义密码 tRNA 修饰的 RNA。另外，T4RNA 连接酶还可用于 RNA/DNA 分子内/分子间连接、甲链寡脱氧核苷酸的连接、克隆全长 cDNA 及将非天然氨基酸掺入蛋白分子中。

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组织中 RNA 提取与检测

等体积异丙醇，震荡后室温静置 5-10 分钟，然后 12000g 4℃ 离心 15 分钟，弃上清保留沉淀。6.加入 1mL75％乙醇清洗并沉淀 RNA，12000g 离心 10 分钟。7.弃上清，并重复上述操作一次，8.弃上清，在超净工作台中打开 ep 管盖，风干 5-10 分钟，不需完全干燥。9.视沉淀的量，加入 10-30 µL RNase-Free 的 DEPC 双蒸水中。10.待沉淀溶解后，用 nanodrop 测定其浓度和纯度并作标记，进行下游实验，多余的 RNA 保存于 -80

操作方法所属实验：总 RNA 提取实验

分离RNA

1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60℃ 加热 5 分钟。5. 再次用旋涡器振荡混匀，冰浴 15 分钟。6. 于 4℃ 以 5000 g 离心 10 分钟，此时溶液很清楚地分成 4 相：底部一小块不溶的沉淀，往上是酚相，再上是连接处的白色 SDS 相及上层含 RNA 的水相。7. 吸出上层水相至新

操作方法所属实验：RNA 分离与分析实验

问怎么用T4 RNA 连接酶链接RNA分子呢？

lzy必有我师

(二）操作方法1) 进行 RNA 与 RNA 分子连接的反应体系如下：供体 (donor)RNA 100-500ng受体 (acceptor)RNA 250ng10XT4RNA 连接酶缓冲液 4ulRNasin 核酸酶抑制剂 (40U/ul

实验问答1 回答580 围观

问RNA的检测

Topmicro

你有没有做阴性对照，看看每次的阴性对照一样吗

实验问答2 回答390 围观

HNADOCK - 一个研究 RNA 与 DNA/RNA 互作的平台

核酸（RNA/DNA）之间的相互作用在许多基本的细胞活动中起着重要作用，例如转录调控，RNA 加工和蛋白质合成。因此，确定 RNA/DNA 之间的复杂结构对于理解相关核酸相互作用的分子机制至关重要。因为结构往往决定了分子的功能，这种核酸-核酸相互作用的结构建模和预测对于理解原子级相关生物过程的分子机制，进而开发针对相互作用的干预性治疗药物或措施也是至关重要的。因为采用实验技术来探究 RNA/DNA 之间相互作用通常是复杂困难且高成本的，因此从核酸序列计算并预测核酸复合体结构并进行分子模拟对接

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RNA测序简介

NGS已成为生命科学领域中基因组学和转录组学研究的金标准。虽然它与桑格测序等方法有某些核心相似之处，但NGS所能实现的绝对的高通量水平使它与其他方法截然不同，并彻底改变了科学家的工作方式。 RNA测序(RNA-seq)尤其处于NGS功能应用的前言沿。RNA-seq最简单的形式允许我们在取样时确定样本中的RNAs的丰度。转录组是一个高度动态的细胞特征，并打开了一个巨大发掘潜力的世界。对药物、各种疾病状态、转录后修饰和选择性剪接转录本的反应变化只是 RNA-Seq 使其能够发现的一些例子

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依据大小分离RNA

RNA 样品经甲酰胺处理以及经含有甲醛的凝胶电泳分离可能会发生变性，这一方法是从 Lehrachetal. (1977), Goldberg (1980)，Seed (1982a）和 Rosen et al, (1990) 修改而来。RNA 在含有 2.2 mol/L 甲醛的凝胶上电泳分离。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。

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RNA 反转录

利用 RNA 模板通过反转录获得 DNA,进而复制和感染细胞

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从果蝇胚胎中提取总RNA或 poIy(A)+RNA

分别为 50 mmol/L，和 5 mmol/L二操作方法1. 准备果蝇胚胎(二）操作方法1) 收集胚胎，用双蒸水漂洗。2) 在 50% 漂白剂中去膜，然后用双蒸水漂洗。3) 把去膜的胚胎放在液氮中速冻。4) 样品可用于提取 RNAt&可以冻存于-60℃5) 融化前将胚胎转移到 50 ml 的管中.2. 总 RNA 的分离1) 在 10 ml 酚和 10 ml 果蝇勻浆缓冲液中勻浆 30s, 以平衡 polytron 匀浆器（以第七档）匀浆。2) 加入约 3 倍体积的果蝇匀浆缓冲液（如：.5 ml 胚胎

操作方法所属实验：从果蝇胚胎中提取总 RNA 或 poIy(A) +RNA