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动物组织RNA的提取

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实验目的:掌握由动物组织中提取总RNA的方法

实验原理:Trizol试剂是一个包含酚、异硫氰酸胍和SDS的单相酸性溶液,其在裂解细胞的同时抑制RNase的活性,随后加入氯仿,酚会大量的溶解在氯仿中。由于DNA和RNA在酸性酚中的溶解性不同,造成DNA分布在下层的氯仿酚溶液中,RNA则分布在上层的水相中,最后用异丙醇沉淀水相中的RNA,并用70%乙醇洗涤沉淀,这样就可以得到比较纯净的总RNA.

实验步骤:

① 先在研钵中加入液氮,再将组织剪成小块在液氮中磨成粉末,用液氮预冷的药匙取50~100mg组织粉末加入已盛有1ml的Trizol液的EP管中(注意组织粉末总体积不能超过所用Trizol体积的10%),充分混合均匀。

② 室温放置5min,然后加入200??l的氯仿,盖紧EP管并剧烈摇荡15秒钟。

③ 12000rpm离心10min,取上层水相于一新的EP管中(千万不要将中间的沉淀层和下层液混入,否则重新离心分离),加入500??l异丙醇,温和颠倒混匀。室温放置10min,12000rpm离心10min。

④ 小心地弃去上清液,加入1ml的75%乙醇,涡旋混匀,4℃下12000rpm离心5min。重复操作一次。

⑤ 弃去上清液(尽量将残余液体除去),室温或真空干燥5~10min(注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度)。用30??l DEPC处理过的水将RNA溶解,必要时可55℃~60℃水浴 10min。RNA可进行mRNA分离,或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。

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