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动物组织和细胞中DNA和RNA的提取

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实验目的
学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法

实验原理
1.从动物组织和细胞中提取DNA
DNA存在于细胞核中。提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术,接着需采用化学和酶学方法,除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。本实验在EDTA(螯合二价阳离子以抑制Dnase)存在的情况下,用蛋白酶K消化真核细胞和组织,用去垢剂(如SDS,十二烷基磺酸钠)溶解细胞膜并使蛋白质变性。核酸通过有机溶剂抽提得以纯化,污染的RNA通过RNase消化清除。这个方法可产生十微克至数百微克的DNA,适用于标准琼脂 糖凝胶上的Southern分析,可用作PCR反应的模板,以及用于构建基因组DNA文库。
2.从动物组织和细胞中提取RNA
RNA存在于细胞质及核中,是一种极易降解的核酸分子 。为了快速从细胞中分离完整的RNA,许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA酶失活,使释放出的RNA不被降解。细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA,核DNA,蛋白质和细胞残片,通过酚,氯仿等有机溶剂处理,离心,使RNA最终与其它细胞组分分离开来。

实验材料
1.实验器材
研钵和研棒,匀浆机,橡胶刮棒,低温冷冻离心机 ,恒温水浴,宽口移液管,锤子,塑料袋,涡旋。
2.实验试剂

实验操作
(一) 用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物 组织和细胞中分离DNA

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