luozhifeng339 请教各位达达，我准备做EMSA，如果做SUPER-SHIFT的话，该选择原装抗体还是分装的抗体呢，盼不吝赐教！ wanglinling 看到一篇EMSA的文章，不知道里面有没有回答你的问题哈，不过英文的值得阅读哈。 GEL SUPER-SHIFT ASSAY/ EMSA Materials/Reagents: See Gel-shift assay Procedure

凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。一、实验原理EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与样本蛋白混合孵育时，样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物；这种复合物由于分子量大，在进行

效率。 (5) 标记好的探针最好立即使用，最长使用时间一般不宜超过3天。标记好的探针可以保存在-20℃。 2. 探针的纯化： 通常为实验简便起见，可以不必纯化标记好的探针。在有些时候，纯化后的探针会改善EMSA的电泳结果。如需纯化，可以按照如 下步骤操作： (1) 对于100微升标记好的探针，加入1/4体积即25微升的5M醋酸铵，再加入2体积即200微升的无水乙醇，混匀。 (2) 在-70℃至-80℃沉淀1小时，或在-20℃沉淀过夜。

EMSA是一个比较复杂的试验技术,由于工作原因接触这个试验技术到现在也有三年多的时间了,做了大概也有几百次吧, 那倒理想的试验结果的同时也碰到了很多莫名的问题和结果,到现在为止还有没有解决的,找不到原因的一个问题,呵呵! 现和smalldonkey商量一下将我对这个实验技术的总结和一个心得写出来给大家分享,批评指正。EMSA实验技术作为一个经典的DNA/protein,RNA/protein的检测技术,不是很多简单的实验技术可以替代的! 比如曾经在我们这个论坛中有站友提到

改善EMSA的电泳结果。如需纯化，可以按照如 下步骤操作：（1） 对于100微升标记好的探针，加入1/4体积即25微升的5M醋酸铵，再加入2体积即200微升的无水乙醇，混匀。（2） 在-70℃至-80℃沉淀1小时，或在-20℃沉淀过夜。（3） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心30分钟。小心去除上清，切不可触及沉。（4） 在4℃，12, 000g-16, 000g离心1分钟。小心吸去残余液体。微晾干沉淀，但不宜过分干燥。（5） 加入100微升TE，完全溶解沉淀。标记好的探针最好立即使用

  Preparing of cell extracts       Cells (e.g. 293 cells) of one 6-well (10 cm2, app. 106 cells): add 100 µl/well : 1x EMSA lysis buffer (stock sol.: 5x ): Ø       Lysis of cells