是： 1.在大规模的装置中培养病毒;2.去除富含病毒培养液;3.通过沉淀将病毒浓缩;4.通过密度梯度离心最终纯化病毒。现在我们讲解每个步骤的一些细节。 1.在大型装置中培养细菌： 为获得足够的用于化学研究的病毒，必须制备大量病毒。每种病毒的培养都有不同的步骤。脊髓灰质炎病毒是在人或灵长类动物细胞系中培养的，可以培养在一大瓶中沿壁生长的单层细胞上，也可以在一个轻轻搅拌的细胞悬液中。在有利病毒生长的条件下，每个宿主细胞能生产10～1000的感染单位的病毒，即每毫升一个感染单位的滴度(或称效价

中培养病毒;2.去除富含病毒培养液;3.通过沉淀将病毒浓缩;4.通过密度梯度离心最终纯化病毒。现在我们讲解每个步骤的一些细节。 1.在大型装置中培养细菌： 为获得足够的用于化学研究的病毒，必须制备大量病毒。每种病毒的培养都有不同的步骤。脊髓灰质炎病毒是在人或灵长类动物细胞系中培养的，可以培养在一大瓶中沿壁生长的单层细胞上，也可以在一个轻轻搅拌的细胞悬液中。在有利病毒生长的条件下，每个宿主细胞能生产10～1000的感染单位的病毒，即每毫升一个感染单位的滴度(或称效价)。

毒 ： 慢病毒包装实验流程如下： 1.根据目的基因相关信息(序列，基因序列号等)获取目的基因; 2.根据客户要求选择对应载体; 3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体; 4. 测序鉴定重组质粒，高纯化(不含内毒素)提取的重组质粒; 5. 使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染293FT 细胞，进行病毒包装并收集上清液; 6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒; 7. 使用病毒液感染293

毒： 慢病毒 包装实验流程如下： 1.根据目的基因相关信息(序列，基因序列号等)获取目的基因; 2.根据客户要求选择对应载体 ; 3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体; 4. 测序鉴定重组质粒，高纯化(不含内毒素)提取的重组质粒; 5. 使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染293FT 细胞，进行病毒包装并收集上清液; 6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒; 7. 使用病毒液感染293

80年代的技术很经典，但那时分子生物学不够发达，现在方法有无进步呢?如何利用现在的技术来鉴定全新的病毒呢?有此想法很久了，可一直未搞清楚。这也跟如何发现一个新基因的道理是相通的。这是真正创新的基础。 网友alishang：我先来最简单的：      1、采集各种病料，用各种细胞、宿主盲传，分离病毒，期望看到细胞病变。如果连细胞病变都没有，没折了？有别的办法证明有病毒吗？。      2、纯化病毒，做电镜观察，与已有病毒形态、大小相似好办，要是完全不一样呢？？？如尼帕病毒和SARS，电镜

浓缩；4.通过密度梯度离心最终纯化病毒。现在我们讲解每个步骤的一些细节。 1.在大型装置中培养细菌。为获得足够的用于化学研究的病毒，必须制备大量病毒。每种病毒的培养都有不同的步骤。脊髓灰质炎病毒是在人或灵长类动物细胞系中培养的，可以培养在一大瓶中沿壁生长的单层细胞上，也可以在一个轻轻搅拌的细胞悬液中。在有利病毒生长的条件下，每个宿主细胞能生产10～1000的感染单位的病毒，即每毫升一个感染单位的滴度（或称效价）。 2.富含病毒培养液的去除。病毒的生长和释放伴随着细胞的破损。在病毒复制完成

1.纯化病毒第一步剪碎法CEF的制备实验前准备PH7.2 PBS（SW配）﹑平皿一小包（３个）﹑饭盒１（器械，玻璃漏斗）﹑饭盒2（纱布）﹑离心管、碘酊﹑废液缸﹑0.1%新洁尔灭溶液﹑0.25%胰酶﹑９日龄ＳＰＦ胚２﹑Ｍ１９９培养基实验步骤1）首先SPF胚新洁尔灭溶液表面消毒，再碘酊﹑酒精消毒，最后小心敲破气室2）准备两把眼科弯头镊子，一把撕破尿囊膜和羊膜，另一把夹鸡胚。用镊子把鸡胚取出，浸泡于已倒入PBS的平皿中①去爪②去内脏3）把鸡胚从平皿中取出，置于另一含PBS的平皿中，再一次洗涤4）重复

基因； 2.根据客户要求选择对应载体； 3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体； 4. 测序鉴定重组质粒，高纯化（不含内毒素）提取的重组质粒； 5. 使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染 293FT 细胞，进行病毒包装并收集上清液； 6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒； 7. 使用病毒液感染 293T 细胞，药物筛选细胞，构建稳定表达细胞系。

纯化病毒第一步 剪碎法CEF的制备 实验前准备 PH7.2 PBS（SW配）﹑平皿一小包（３个）﹑饭盒１（器械，玻璃漏斗）﹑饭盒2（纱布）﹑离心管２﹑碘酊﹑废液缸﹑０.１％新洁尔灭溶液﹑０.２５％胰酶﹑９日龄ＳＰＦ胚２﹑Ｍ１９９培养基 实验步骤 Ⅰ 首先SPF胚新洁尔灭溶液表面消毒，再碘酊﹑酒精消毒，最后小心敲破气室 Ⅱ