超速离心法纯化病毒实验

实验分类：

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

病毒粒子经过初步浓缩之后，要进一步纯化，通常采用超速离心法 (ultracentrifugation)。来源：《病毒学检验》

来源：丁香实验

操作方法

差速离心法（超速离心纯化病毒实验）

将被分离的样品交替进行低速离心与高速（或超速）离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附－释放的病毒悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时，由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在，提纯效果不理想。以差速离心法分离提纯病毒时，经常以低速 (2 000~3 000 r/min, 20~30 min) 及中速(10 000 r/min,20~30 min) 去除较大

密度梯度离心（超速离心法纯化病毒实验）

(1) 根据病毒的密度选择适宜的溶质，用梯度制备仪制成适宜的梯度介质，病毒的密度最好包括在梯度介质的中部或近介质底部 1/3 处。 (2) 将欲纯化的病毒悬液约 1 ml 小心铺加于梯度介质，以 20 000g~40 000 g 离心 2~4 h离心速度和离心时间的选择可根据病毒的大小而定，如流感病毒需 28 000 g,而如乙脑病毒则应40 000g 。 (3) 病毒沉于介质的中部形成一明显的

等密度梯度离心

在每毫升病毒悬液中，加入 CsCl 约 1 g, 混匀，4℃以 40 000g 离心24~36 h 。可重复 2 次，所得的病毒纯度比其他方法高。

界面离心分离法

(1) 取浓缩后的病毒悬液 5 ml, 加入 1/5 或 1. 66/5 体积的 600 g/L 的蔗糖溶液，使其含蔗糖10%~15%, 摇匀。(2) 取一内盛 4 ml 40%~60% 的蔗糖溶液的离心管，将上述病毒悬液小心铺加于此蔗糖溶液上面，于 20 000~40 000g( 根据病毒的大小和密度而定）离心 60~90 min血病毒在两个界面间形成一条明显的带。(3) 小心用毛细吸管或注射针