原理
不同大小和比重的粒子在沉降速度上存在差别,沉降速度差别(相差)在一个或几个数量级的粒子,可用本法分离提取。
材料与仪器
待纯化的病毒
无
差速离心机
无
差速离心机
步骤
将被分离的样品交替进行低速离心与高速(或超速)离心。差速离心适用于从组织培养液、鸡胚尿囊液或经过红细胞吸附-释放的病毒悬液中提纯病毒。在由感染细胞或组织匀浆中提取病毒时,由于与病毒大小相近的细胞亚单位及碎片的存在,提纯效果不理想。
以差速离心法分离提纯病毒时,经常以低速 (2 000~3 000 r/min, 20~30 min) 及中速(10 000 r/min,20~30 min) 去除较大的宿主细胞碎片、污染的细菌及其它较大的杂质。然后,选择在 60 min 内能够沉淀 80% 以上的病毒粒子的较高速度,离心 1~2h使病毒沉淀。
常见问题
差速离心法的优点是能迅速处理大量样品,故常作为病毒精制的第一个阶段,或者用于病毒样品的浓缩和粗提。
来源:丁香实验