聚乙二醇 (PEG) 浓缩法及超过滤法纯化病毒实验

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

病毒的主要组成成分是核酸及蛋白质，因此纯化病毒的方法同纯化蛋白质及核酸的技术有很多相似之处。病毒的种类繁多，一种病毒可以有多种不同宿主，而且对理化因子抵抗力也有所不同通常可根据病毒和宿主的性质及各实验室的条件不同而选用不同的提纯方法来获得高纯度的病毒。病毒纯化原理为：病毒颗粒与宿主细胞中的一些正常组分，在理化特性上存在某些差异，利用这些差异，用物理或化学的方法尽可能地去除其组分，将病毒从其宿主细胞内提纯出来，并且在纯化过程中保持病毒的生物活性和感染性。来源：《病毒学检验》

来源：丁香实验

操作方法

聚乙二醇 (PEG) 浓缩法

操作方法有以下三种。1. 直接加入法当只有少量的病毒悬液时采用此法。在病毒悬液中加入 8%~10% 的PEG搅匀使病毒沉淀。此法须以密度梯度离心法去除病毒沉淀物中的 PEG 。2. 液体浓缩法 ①用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放病毒，3 000 r/min 离心 30 min,除去细胞碎片；②缓慢搅动并加入 NaCl , 使最终浓度为 0. 5mol/L NaCl , 再加人等量的 PEG,4

超过滤法

该法通常将孔径比病毒颗粒小的硝酸纤维素滤膜，置于特制的滤器中（亦可用蔡氏滤器代替），通过高压过滤的方法去除液体。用该法浓缩后病毒悬液中的盐分不会增加。注意超过滤法只能除去比病毒小的细胞碎块。