聚乙二醇（PEG）沉淀实验检测CIC

聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）是一种无电荷的直链大分子多糖，可非特异性地引起蛋白质沉淀。沉淀具有可逆性，被沉淀的蛋白质生物活性亦不受影响。不同浓度的PEG可沉淀分子量不同的蛋白质，在pH值、离子浓度等条件固定时，蛋白质分子量越大，用以沉淀的PEG浓度越小。由于PEG6000对蛋白质沉淀具有良好的选择性，所以在IC测定中主要采用PEG6000。

PEG使IC沉淀的机理可能在于使其自液相中空间排斥而析出，此外，PEG还可抑制CIC解离，促进CIC进一步聚合成更大的凝聚物而被沉淀。在被检血清中加入低浓度PEG，可将血清中的IC沉淀下来，利用透光率比浊或散射比浊法可测出CIC的存在与含量。本法简便易行，国内已广泛应用。

1、试剂

（1）0.1mol/L pH8.4硼酸盐缓冲液（borate buffer solution，BBS） 硼酸（H3B03）3.40g，硼砂（Na2B407·10H20）4.29g，蒸馏水溶解后，加至1 000mL。用G3或G4玻璃滤器过滤。

（2）PEG-NaF稀释液 PEG6000 40.9g，NaF 10.0g，用BBS溶解后加至1000mL，用G3或G4玻璃滤器过滤。

（3）热聚合人IgG 将人IgC（10mg/mL）置63℃水浴加热15rain，立即置冰浴内，冷却后过Sepharose4B柱或SephacrylS-300柱，收集第一蛋白峰。所获热聚合人IgG可用考马斯亮蓝法测定蛋白含量。也可取人IgG（10mg/ml）10ml，搅拌下滴加1.8%戊二醛100uL，24h后加入0.4mol/LpH5.4，Tris-HCl缓冲液100uL终止反应，过Sepharose 4B或Sephacryl S-300柱，用0.01mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液洗脱，收集第一蛋白峰。加入牛血清白蛋白至0.5%，分装后-40℃保存。试验中可用作阳性对照和制备标准曲线。

2、操作步骤

（1）取待测血清0.15ml，加BBS0.3ml（1：3稀释）；

（2）按表10-1加入各液（待测血清最终稀释倍数为1：33，PEG最终浓度为3.64%）；

（3）将测试管及对照管置37℃水浴60rrfin；

（4）分光光度计在波长495nm测吸光度，用对照管调零。

3、结果判断

待测血清浊度值：（测定管吸光度—对照管吸光度）×100。以大于正常人浊度值的均值加2个标准差为CIC阳性。

参考值：4.3±2.0，以大于或等于8.3为CIC阳性。或以不同浓度热聚合人IgG按以上方法操作制备标准曲线，根据待测血清吸光度值查标准曲线，即可得IC含量（相当于热聚合人IgG的ug/mL）。

4、注意事项

（1）低密度脂蛋白可引起浊度增加，故应空腹采血；

（2）高丙球血症或血脂含量过高及标本反复冻融，均可导致IC检测出现假阳性；

（3）此法快速、简便，但特异性较差，较适用于血清标本的筛查。