吸附法纯化病毒实验

微生物实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

病毒颗粒表面特有的离子对离子交换树脂和与之类似的吸附剂有亲和性，病毒吸附之后，在适当的离子条件下可使病毒颗粒脱吸，利用这一原理可以提纯病毒。常用的吸附剂有磷酸钙凝胶、氢氧化锌凝胶、红细胞、葡聚糖、活性炭等。吸附法的专一性不强，对吸附剂的亲和性因病毒不同而异。来源：《病毒学检验》

来源：丁香实验

操作方法

凝胶吸附法

磷酸钙凝胶：这是病毒凝胶吸附法中较为常用的凝胶，由 0. 5 mol/L CaCl2 和 0. 5mol/L Na2HPO4 溶液混合制备凝胶状沉淀物，用 0. 001mol/L 磷酸盐缓冲液悬浮，置千 4℃ 4~5小时使之充分沉淀后应用。氢氧化锌凝胶：用 7 mol/L 氨水和 0. 1 mol/L 醋酸锌溶液滴加混合 (pH8. 5) 制备氢氧化锌凝胶。把氢氧化锌凝胶混在病毒悬液中，形成的复合

红细胞吸附法

用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞，常用的是鸡红细胞。基本步骤为：① 1%~3% 鸡红细胞与病毒悬液混合， 2℃吸附 1 h 以上或过夜；②1 000r/min(用福尔马林处理的红细胞可用 2 000r/min) 离心 10 min, 沉淀吸附病毒的红细胞。弃上清，用冷生理盐水洗涤 2 次；③再用 1/50 原体积（鸡红细胞与病毒悬液混合液体积）的0. 01 mol/L 磷酸缓冲盐水 (

葡聚糖柱层析法

(1) 经初步纯化浓缩后的材料，通过葡聚糖 G150 或 G200 柱层析。(2) 用 0. 02~0. 15mol/L 磷酸缓冲液 (pH 7. 0~7. 6) 洗脱，洗脱时适宜流速为 2~5ml/(cm2•h) 。分部收集，测定各部分对 280nm 波长的 A 值，并滴定 A280值的各部分的效价。(3) 将含病毒的各部分相混合，再用下述方法之一进行浓缩之后，即获纯度相当高的病毒。