原理
用于某些可与红细胞吸附的病毒的浓缩,如正粘病毒和副粘病毒,由于红细胞吸附法是特异的,故可达到浓缩并纯化的目的。
材料与仪器
待纯化的病毒
磷酸盐缓冲液 鸡红细胞悬液
烧杯 水浴锅
磷酸盐缓冲液 鸡红细胞悬液
烧杯 水浴锅
步骤
用作吸附病毒的红细胞一般选择适宜动物的红细胞,常用的是鸡红细胞。基本步骤为:
① 1%~3% 鸡红细胞与病毒悬液混合, 2℃吸附 1 h 以上或过夜;
②1 000r/min(用福尔马林处理的红细胞可用 2 000r/min) 离心 10 min, 沉淀吸附病毒的红细胞。弃上清,用冷生理盐水洗涤 2 次;
③再用 1/50 原体积(鸡红细胞与病毒悬液混合液体积)的0. 01 mol/L 磷酸缓冲盐水 (pH7. 5~7. 8), 将血细胞垂悬于 37℃水浴中保温 2~3 h;
④(1 000~2 000)r/min离心 10 min, 上清即为浓缩并部分纯化的病毒悬液。可将最后释放过程重复进行1次,以回收剩余病毒。
来源:丁香实验