大讨论：利用现有技术，如何鉴定一个全新的病毒呢?

80年代的技术很经典，但那时分子生物学不够发达，现在方法有无进步呢?如何利用现在的技术来鉴定全新的病毒呢?有此想法很久了，可一直未搞清楚。这也跟如何发现一个新基因的道理是相通的。这是真正创新的基础。

网友alishang：我先来最简单的：
1、采集各种病料，用各种细胞、宿主盲传，分离病毒，期望看到细胞病变。如果连细胞病变都没有，没折了？有别的办法证明有病毒吗？。
2、纯化病毒，做电镜观察，与已有病毒形态、大小相似好办，要是完全不一样呢？？？如尼帕病毒和SARS，电镜看的出来。大家有看到发现新病毒的文献报道吗？
3、可否直接抽病料中的基因组，来个大海捞针？不过怎么从中鉴定呢？
4、电镜看不出形态、大小，纯化病毒跑二维电泳挖蛋白点测序行不？好象可行哦。
我先想这么多，大家继续啊……

网友mark7447：这是一个很好的题目，不过应该有很多人在考虑，我谈谈我的想法。
1、能不能找一种对所有病毒都敏感的细胞，当有新的病毒出现时，可以直接培养，无论有无CPE，先拿到病毒就可以进行下一步的工作了。
2、可不可以用随机引物对生物标本进行扩增，测序后比对序列，定出是否是新的病原。
3、急性期及恢复期的血液标本特别重要，一定要尽量收集多份总量的血清，进行中和实验等等。
4、应该遵循郭霍法则，进行相关的动物实验研究。

网友alishang：经询问，你的第二点在测序公司是能实现的，第一点几乎是不可能完成的任务。

网友docxat：想知道如何鉴定，建议看看SARS的文献吧，好多哦。

网友黑山大王：我是这样做的：
1、纯化病毒粒子，在电镜下观察其形态，如果病毒量大，可以制多抗 ，看看和已知的病毒有没有免疫交叉反应。
2、蛋白N端测序---序列比较----PCR引物设计---PCR---测序---核酸序列比较。
Sars的鉴定，相对大家可能是最浅显的例子，经电镜一看，心中就能有所判定(冠状)，能抓住方向。如果是一个全新的病毒，在形态上不能归类，只知道大小，如何往下做呢?

网友alishang说：鉴定一个全新的病毒，我想，要证明以下方面:
1、不是已有的病毒;
2、是新的
3、有什么特性
4、下结论，是什么病毒
根据80年代的文献，这些是能实现的。关键是如何利用现有的技术?现有技术在解决这个问题上有无进步??

网友nylli的观点是：如前面的人所述，临床经验是相当重要的，还有组织病理知识等等一些基础也是必不可少的。关键是做出判断是否为新的病毒。

RISC网友的观点是：
1、目前分离鉴定一种新型病毒确实很难，不只有技术上的限制，还有学术权威等潜在的影响。
2、重视临床信息（体征、临床标本及辅助检查结果以及预后等等）与实验室工作的结合。有效的临床信息可以帮助缩小范围，为实验室工作的研究方案提供指导。
3、传统的病毒盲传分离培养方法还是非常有效的，不能小看。目前还是作为一个金标准。
4、借助分子生物学手段从核酸入手，比如可以根据目前已知的各个种属的病毒的保守区PCR引物，建立一个通用PCR引物库，将来有了高通量的技术平台时可以借助引物库进行快速鉴定。当然这也只是一个设想。
5、蛋白水平的研究，比如2D电泳等将来达到一个比较成熟的技术平台，可以有效的进行病毒与宿主蛋白差异表达的研究，作为研究新型病毒的信息。
一点拙见，请大家批评指正。

kinky网友的观点是：据说通过纯化病毒，做电镜观察其形态几乎是不可能的。因为病毒颗粒太小，要找到一个合适的视野特别难，所以这个方法是书本上说起来容易，实际操作起来难度很大。

freecell网友说：我的意见和RISC的差不多。新病毒的鉴定是个贯穿多学科的过程。
第一：是重视临床鉴别诊断。例如2003年的SARS发现，就是通过与常见呼吸道病毒或其它病原微生物的症状进行鉴别，从而得到部分线索；
第二：是血清学检验方法的运用。利用抗原捕捉ELISA，筛选和排除可疑病原体；采用双份血清IgG、IgM进行检测，分析抗体产生规律，摸清感染进程；
第三：是经典病毒学方法的运用。接种细胞，产生CPE。但是HCV的细胞模型直到去年才建立起来。一般认为，在电镜下观察到病毒颗粒，是病毒鉴定的金标准；
第四：是运用分子生物学方法，分别进行扩增，排除可疑病原体。在得到序列的情况下，进行BLAST，得到病毒的大致分类位置；
第五：当然是功能基因组学和蛋白质组学方法了，例如基因芯片、2D等。有趣的是，轮状病毒不同型的鉴别，是通过SDS-PAGE实现的，而且至今尚在应用；
值得一提的是，上述方法并非截然分开的，需要进行综合运用。鉴定一个全新的病毒，需要扎实的理论、丰富的经验、睿智的实验设计、大胆的推测演绎。

天行者007网友说：我们是按照以下步骤进行的（我们是做水产病毒鉴定与检测的）
1、采集病料，分离细菌的有无，如没有细菌，进行电镜观察，根据病毒的形态初步鉴定
2、利用可能敏感的细胞、分离病毒，观察细胞病变，电镜观察。
3、利用宿主（鱼类）进行病毒的回归感染试验，观察病鱼的病症，同时进行电镜观察。
4、纯化病毒，做电镜观察。
5、直接抽病毒的基因组（分清是DNA还是RNA病毒），根据目前已知的各个种属的病毒的保守区PCR引物进行初步的PCR。
6、进行病毒的基因组的酶切分析，同时采用AFLP分析（DNA病毒），切胶测核酸序列，进行Blast 比对（我们的结果就出来了）
7、纯化病毒后进行一维、二维电泳挖蛋白点测序，应该可行，但是我们没有做

tgzhaoyujun网友的观点是：个人认为要确定是否是新的病毒，在出现病变或相应的生理反应或影响理论上应该出现的结果时，并且病原是滤过性的，可以怀疑是新病毒，不能纯化出病毒或在电镜下看到或出现CPE，不能否认病毒的存在。涓涓细流而成江河，遇到的人多了，总会出现转机的。

whw3791网友说：这是一个很有意思的话题，病毒首先得能通过滤膜，一般情况下最好有宿主的细胞株，有的病毒如马立克病毒是细胞毒，脱离细胞就不能生存，而有的病毒是很活泼的!病毒的确定要有丰富的临床经验!

noheart_ren网友的观点是：做病毒的，以下是我们的经典途径:tissue culture(CPE)-----EM observe(电镜)------serology test------histology，pathological character----molecular detection-----animal experiment

xiangtian2004网友的观点是：有的时候病毒未必能够培养成功，所以基因组应该是必须的。现在的微生物基因组学可以提供很多的有用的相关的信息，比如分析比对寻找相近的谱系。现在的病毒的基因文库也应该逐渐的完善丰富的，看过闻玉梅老师2001年的有关微生物基因组学国际大会的相关的许多述评，主要讲的微生物是细菌。最近几年的有关国际微生物基因组学的大会的文章还没有见到，没有来得及去搜索，不知目前的进展如何？