慢病毒包装实验流程

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慢病毒(Lentiviruses)属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核，从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性使慢病毒成为基因治疗的转移载体 。 HIV (Human immunodeficiency virus) 、EIAV (Equine infectious anemia virus) 、 FIV (Feline immunodeficiency virus) 、 SIV (Simian immunodeficiency virus) 。其中研究最多最为透彻的是HIV。

重组慢病毒的产生：瞬时转染法，即将包装结构和载体结构瞬时共转染法如293T 高表达细胞系而产生重组慢病毒。此法非常成功，大多实验室采用此法。包膜质粒 、包装质粒与载体质粒共转(多用磷酸钙共沉淀法)染293T细胞直接产生生产细胞。最后重组慢病毒分泌到培养基中进行培养而得到大量载体慢病毒。

三质粒来包装产生重组慢病毒 ：

<center> <img alt="慢病毒包装实验流程" height="269" src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/09/06/A1378380446.jpg" width="560" /></center>

慢病毒包装实验流程如下：

1.根据目的基因相关信息(序列，基因序列号等)获取目的基因;

2.根据客户要求选择对应载体;

3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体;

4. 测序鉴定重组质粒，高纯化(不含内毒素)提取的重组质粒;

5. 使用高纯提重组载体和慢病毒包装质粒共转染293FT 细胞，进行病毒包装并收集上清液;

6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒;

7. 使用病毒液感染293T细胞，药物筛选细胞，构建稳定表达细胞系。