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慢病毒包装实验
慢病毒载体包装之后成为假病毒颗粒后，可用于：（1）感染原代培养细胞；（2）制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株；（3）in vivo的基因操作、转基因动物，特别是转基因大鼠的制备。
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造血细胞的慢病毒转导
大多数造血细胞 ，包括造血干细胞和终末分化细胞，如初生 T 细胞和巨噬细胞，是不分化或自我更新缓慢的。对于这些细胞，大多数非病毒或反转录病毒转染方法是不可行的。慢病毒载体适用于转染未分化的细胞以及长效维持转基因的表达。带有各种基因的慢病毒载体已成功转染许多造血细胞。慢病毒载体可用于许多转载操作，如短发夹R N A (sh R N A )和功能基因的长效表达。它们在基因治疗方面也将有很大的潜力。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
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慢病毒包装实验
入DNA-脂质体复合物。 6. 将1ml重悬的293T细胞（1x106个细胞/ml）加入到平板中。37℃ CO2孵箱中孵育过夜。 7. 移除含有DNA-脂质体复合物的培养基移除，代之以DMEM（含丙酮酸钠和非必须氨基酸）。 8. 转染后48-72h收获含病毒的上清。3000 rpm 离心20min，去除沉淀。 9. 病毒上清-80℃贮存。 包装出来的慢病毒对NIH/3T3细胞达90%以上感染效率。
操作方法所属实验：慢病毒包装实验
慢病毒产生和滴度
根据所需的用途，sgRNA 库可以由慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒（AAV）提供。慢病毒和逆转录病毒整合到基因组中，而腺相关病毒不整合， 因此对于筛选，腺相关病毒的递送仅限于非分裂细胞。相反，逆转录病毒只转导分裂细胞。此外，与慢病毒和逆转录病毒相比，腺相关病毒的插入容量更小。因此，到目前为止，大多数的筛选依赖慢病毒递送。
操作方法所属实验：全基因组CRISPR-Cas9基因敲除和转录激活筛选实验
慢病毒原来可以这样用！
慢病毒（Lentiviral，LV）可将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久性表达，这一特性使其在科研与临床治疗（CART）中大放异彩。 但在临床治疗中，外源基因的整合会带来插入突变的风险。这种情形下，研究者开始拓展非整合慢病毒的可能性。 IDLV(Integration-deficient Lentiviral) 即整合缺陷型慢病毒，是通过在慢病毒整合酶中引入突变产生的非整合型慢病毒，「不整合」的特性使其更适合于静息细胞、临床治疗、干细胞研究等场景使用。 与其他载体相比，其优势
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慢病毒高分论文应用案例
蛋白的复合物晶体结构，又基于晶体结构分析，设计并合成了特异性及体内安全性显著提高的雷公藤红素衍生物 19-048，证明了雷公藤红素的体内毒性，可以通过靶标发现及基于结构的化学优化而降低，同时表明，抑制 PRDX1 有望用于治疗结直肠癌。值得注意的是，本研究使用了汉恒生物提供的针对 PRDX1 的 CRISPR-Cas9 慢病毒。 下面，我们一起来看具体的研究结果： 首先，作者通过 RNA 测序得到用雷公藤红素处理后的差异表达基因，然后用 OTTER 富集雷公藤红素的氧化还原相关靶蛋白，发现雷公
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研发表达 SiRNA 的慢病毒载体实验
本章描述了如何使用慢病毒载体传递小干扰RNA (siR N A )介导的沉默盒。这两种技术的结合发展成为体内外长期降低特定靶标基因表达的强大工具。它结合了 RNA干扰的特异性和慢病毒载体的多功能性，可以转染多种类型的细胞。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
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慢病毒转导和筛选
根据所需的用途，sgRNA 库可以由慢病毒、逆转录病毒或腺相关病毒（AAV）提供。慢病毒和逆转录病毒整合到基因组中，而腺相关病毒不整合， 因此对于筛选，腺相关病毒的递送仅限于非分裂细胞。相反，逆转录病毒只转导分裂细胞。此外，与慢病毒和逆转录病毒相比，腺相关病毒的插入容量更小。因此，到目前为止，大多数的筛选依赖慢病毒递送。
操作方法所属实验：全基因组CRISPR-Cas9基因敲除和转录激活筛选实验
病毒滴度检测——慢病毒
慢病毒滴度检测采用稀释计数测定法滴度单位：TU/mL，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。「TU」为「transducing units」的缩写，中文为「转导单位」，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。1. 加病毒第二天，准备6个1.5 mL EP管，第一个EP管中加入10 μL病毒原液，然后做3倍梯度稀释，共6个稀释度。2. 追加培养液第三天，有需要加puromycin筛选的孔，先吸去100 μL含病毒培养基，加入100 μL 含1.5 μg/mL puromycin的10
操作方法所属实验：慢病毒包装实验
慢病毒使用操作指南
一、慢病毒的储存与稀释： 1. 病毒的储存：用户收到病毒液后在很短时间内即使用慢病毒进行实验，可以将病毒暂时放置于4 ℃保存；如需长期保存请放置于-80℃（病毒置于冻存管，并使用封口膜封口） 注：A．病毒可以存放于-80℃ 6个月以上；但如果病毒储存时间超过6个月，我们建议在使用前需要重新滴定病毒滴度。 B．反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%；因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融，为避免反复冻融我们强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量进行分装。 2. 病毒的稀释：用户需要
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用表面修饰的慢病毒载体转运靶基因
为了实现靶基因的转运，对慢病毒载体做了两类表面修饰：①利用其他病毒的定向性，结合异源病毒糖蛋白（称之为假型）；②异源的多肽与病毒糖蛋白融合使得慢病毒颗粒能重新靶向感兴趣的细胞。本章提供一个提升慢病毒载体组织靶向性的新颖的方法，以及一个靶向转导造血干细胞( H S C ) 的示例方案。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
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制备抗补体灭活的假型慢病毒载体
本试验方案描述了几种产生补体稳定的慢病毒载体的方法，这些方法是通过利用含有补体调节蛋白CD55 (降解加速因子， D A F ) 的融合包装蛋白来产生假型病毒质粒，或是采用天然的D A F 与包装蛋白共组装来产生新型的慢病毒。作者：T.弗里德曼等,译者：殷勤伟等，本实验来自「基因转移」
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慢病毒感染细胞
细胞慢病毒感染（1） 贴壁细胞： a. 处于对数生长期的细胞胰酶消化，完全培养基制成 3~5×104 个/mL 细胞悬液，并根据表 1 接种相应的细胞数到培养板中，继续培养保证感染时铺板量达到 15%~30% 左右。表 1. 贴壁细胞接种和病毒感染时感染液体积 b. 按照预实验结果，参考表 1 更换感染培养基，加入最适病毒量进行感染。 c. 参照预实验结果，选择感染后最适时间点更换为常规培养基继续培养，一般为感染后 8~12h 左右。（2） 悬浮细胞：
操作方法所属实验：病毒感染细胞实验
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