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基本方案
将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管;6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;8. 重复实验,验证
操作方法所属实验:重叠延伸 PCR
直接原位PCR
将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好,然后分装,这样即可以减少操作,避免污染,又可以增加反应的精确度;5. 最后加入反应模板,加入后盖紧反应管;6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照,即可验证PCR反应的可靠性,又可以协助判断扩增系统的可信性;7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器,由于加样器最容易受产物气溶胶或标本DNA的污染,最好使用可替换或高压处理的加样器。如没有这种特殊的加样器,至少PCR操作过程中加样器应该专用,不能交叉使用,尤其是PCR产物分析所用加样器不能拿到其它两个区;8. 重复实验,验证
操作方法所属实验:直接原位 PCR
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微量加样器的质量控制

微量加样器是微量酶免疫测定中加样时必用的设备,其使用和校准对酶免疫测定结果有直接的影响,以下对如何正确地使用微量加样器及其校准等进行介绍: 1. 加样器的使用 1.1 吸液 标准吸液步骤如下: 1.1.1 把按钮压至第一停点;     1.1.2 垂直握持加样器,使吸头浸入液样中,浸入液体深度视型号而定(见附表) 不同加样器允许浸入液体深度        

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微量加样器的质量控制

       微量加样器是微量酶免疫测定中加样时必用的设备,其使用和校准对酶免疫测定结果有直接的影响,以下对如何正确地使用微量加样器及其校准等进行介绍:        1. 加样器的使用        1.1 吸液 标准吸液步骤如下:        1.1.1 把按钮压至第一停点;        1.1.2 垂直握持加样器,使吸头浸入液样中,浸入液体深度视型号而定(见附表)        不同加样器允许浸入液体深度      

文章资讯1611 阅读
多样抽滤法
1.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的尼龙膜,将膜置于6xSSC的表面让其自然浸没。放置10 min。 2.  裁一张与多样过滤加样器一样大小的Whatman 3 MM 滤纸,用6xSSC浸湿。 3.  将Whatman 3 MM 滤纸置于多样抽滤加样器上,将膜放置于其上。将多样抽滤加样器按厂商说明书安装好,确保装置中不漏气。4.  在DNA中加入20xSSC使其终浓度为6×SSC,体积为200~400 ul,在100℃变性10 min,然后置于冰中。 5.  连接吸液装置与多样
操作方法所属实验:DNA 斑点和狭线印迹实验
基本方案
1. 选择适当的 96 孔微量血凝板,如果使用鸡或火鸡红细胞,应选用 V 型微量血凝板;如果使用豚鼠或人"O"型红细胞,应选用 U 型微量血凝板。2. 除第 1 列外,其它所有孔中均加入 50 µL 生理盐水或 PBS。3. 在第 1 列的每孔中分别加入 100 µL 待检病毒标本。4. 用多道加样器从第 1 列的每孔中吸出 50 µL 加至第 2 列相应的每孔,混匀。依次作倍比稀释至第 11 列,混匀后弃去 50 µL。5. 第 12 列各孔作红细胞对照。6. 用多道加样器在板中每孔中
操作方法所属实验:血凝试验和干扰滴定测定病毒滴度
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单向、双向免疫琼脂扩散和免疫电泳(图)

用以定量检测未知标本的抗原浓度(mg/ml或U/ml)。应用这一实验方法可检测正常人群或患者血清中IgG、IgA 及IgM的水平。二、实验材料 2%离子琼脂或生理盐水琼脂(采用0.9%的生理盐水,内含0.1% NaN3)。   标准马抗人IgG血清(抗体)(北京生物制品研究所生产)   工作标准参考蛋白(北京生物制品研究所生产)   PBS (pH7.2,0.01M).   打孔器(孔径3mm)及打孔模板   微量加样器   湿盒(容器内加湿纱布或泡沫塑料)   已制备好的含有1%马抗

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可调式移液器的标准操作程序

一.目的 规范仪器设备的操作程序,保证加样器的正常状态。 二.适用范围 本实验室加样器的操作。 三.操作人员 本实验室实验人员。 四.操作步骤 1.设定容量值:转动加样器的调节旋钮,反时针方向转动旋钮,可提高设定移液量。顺时针方向转动旋钮,可降低设定移液量。在调整设定移液量的旋钮时,不要用力过猛,并应注意使移液器显示的数值不超过其可调范围。 2.预洗:当装上一个新吸头时应预洗吸头,先吸入一次液体并将之排回原容器中。 3.吸液: [1] 选择合适的吸头安放在移液套筒上,稍加扭转压紧

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人群血清IgG 正常值测定示例法
一、实验材料2%离子琼脂或生理盐水琼脂(内含2%NaN3)。标准马抗人 IgG 血清(抗体)(北京生物制品研究所生产)工作标准参考蛋白(北京生物制品研究所生产)pH7.2 PBS打孔器(孔径3 mm)及打孔模板微量加样器湿盒(容器内加湿纱布或泡沫塑料)已制备好的含有 1%马抗人IgG 抗体的琼脂板1/50 稀释的单人份待检血清标本二、实验方法1、标准曲线的制备(1)按照玻片的大小,准备制做琼脂板所需要的1%离子琼脂。首先分装其1/2 量的2%盐水琼脂,例如,用普通载玻片制做时需1%离子
操作方法所属实验:单向免疫扩散实验
高效转化法
,需要 3.0~4.5 个小时。该培养物可用于 10 次转化。5. 用一个灭菌的 50 ml 离心管收获培养物,3000 g 离心 5 分钟。6. 倒掉培养基,用 20 ml 灭菌水重悬细胞,再次离心。7. 倒掉水,用 1.0 ml 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞,并转移到一个 1.5 ml 的微量离心管中。8. 用微量离心机以最高转速离心 15 秒,用微量加样器吸出 LiAc。9. 用 100 mmol/L 的 LiAc 重悬细胞,使终体积为 500 μl,于 30℃ 孵育 15
操作方法所属实验:酿酒酵母的 LiAc/ssDNA/PEG 高效转化法实验
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可调式移液器的标准操作程序(SOP)

  【目的】  规范仪器设备的操作程序,保证加样器的正常状态。 【适用范围】  本实验室加样器的操作。 【操作人员】  本实验室实验人员。 【操作步骤】 一、设定容量值:转动加样器的调节旋钮,反时针方向转动旋钮,可提高设定移液量。顺时针方向转动旋钮,可降低设定移液量。在调整设定移液量的旋钮时,不要用力过猛,并应注意使移液器显示的数值不超过其可调范围。 二、预洗:当装上一个新吸头时应预洗吸头,先吸入两次液体并排回原容器中。 三、吸液:

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免疫组织化学抗体的稀释度、滴加与操存

结合的机会。如果玻片上是培养细胞,应在镜下选择一个理想的区域用免疫组织化学油笔在此区域外围画一圆圈,再滴加抗体,尔后应轻轻摇动切片数秒,以促进抗体与组织待测抗原的结合,避免假阴性小区的出现。这一操作过程虽然简单,却十分重要。加抗体时切忌加样器或吸头碰到组织或细胞,以免造成破损。 《四》抗体的操存     1.抗体分装购人的浓缩型抗体,为避免反复冻融而失效,一般需要分装在多个安瓿中,根据需要量,每安瓿含10一20rA。除留一支现用,其余应立即放置低温冰箱内贮存(-20℃以下)。用时取一支。以免长期

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血凝试验
血凝试验的基本过程可分为如下几步:1. 选择 96 孔板,如使用鸡或火鸡红细胞,应选 V 型微量血凝板;如使用豚鼠或人 O 型红细胞,应选 U 型微量血凝板。将微量板横向放置:垂直方向称列,如孔 A1~H1 称为第一列;平行方向称行,如 A1~A12 称为 A 行。标记好待检病毒的实验室编号及加样顺序。2. 病毒液倍比稀释1)加 PBS:取 8 道加样器于加样槽中吸取 50μl PBS 加入微量板的第二列,依次加入 50ul PBS 直至最后一列。2)加入待检病毒:单道加样器吸取 100 μl
操作方法所属实验:血凝试验及血凝抑制试验
免疫电泳试验
1. 琼脂板的制备  将洁净之载玻片置于水平台面上,用吸管吸取 4ml1.2%热溶的琼脂于载玻片上,待凝固后按图4-13打孔及开槽。2. 加样  挑去孔中琼脂,用微量加样器于上孔加待检血清15μl,下孔加IgG溶液(lmg/ml)15μl。3. 电泳  置电泳槽中,用三层纱布作电桥,将近孔的一端连接阴极,另一端接阳极,以端电压6V/cm电泳1~2h。4. 扩散  电泳后挑去长槽内琼脂,用热溶的1.2%琼脂封底。然后于槽中加入兔抗人血清抗体,置湿盒内,于37℃温箱中扩散24h,连续观察
操作方法所属实验:免疫电泳试验
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质粒 DNA 琼脂糖凝胶电泳定量及定量检测

2 -3mm 。 4 .取 4ul 质粒,加 2ul lodaing buffer , 6ulddH 2 O ,混匀,用加样器吸取样品。加入点样孔中,注意加样器吸头应恰好置于凝胶点样孔中,不可刺穿凝胶,也要防止将样品溢出孔外。 5 .接通电源, 1-5V/cm 电压,开始电泳。 6 .当溴酚兰染料移动到距离胶前沿 1 -2cm 处,停止电泳。 7. 切断电源后,取出凝胶,在紫外灯( 360nm 、 312nm 或 254nm )下或经凝胶成像系统观察或拍照。 附注: 影响 DNA 片段琼脂糖电泳的几个因素

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