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双抗体夹心ELISA空白对照假阳性

相关实验:酶联免疫吸附(ELISA)实验

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dxy_727q0z76

多克隆抗体和噬菌体展示纳米抗体配对时,做了实验组和空白组,空白组只是不加待测物,其他都和实验组一样,本来不加待测物的空白值应该很低或者没有,但是现在空白值有0.5以上,有时甚至能到1以上。优化过封闭时间、孵育时间、抗体浓度和稀释液,结果没有解决

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3 个回答

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sswei

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假阳性的出现通常是样本中掺杂有同源或同工物质。

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土井挞克树

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假阳性可能是你的试剂污染,有假蛋白干扰,建议更换特异性抗体

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loveliufudan

有帮助

这种情况可能由多种因素导致,以下是一些可能的原因和相应的解决策略:

1. 非特异性结合:这可能是因为你的抗体或者噬菌体纳米抗体与酶标板或其他非特异性蛋白质发生了结合。你可以尝试更换不同类型的酶标板,或者增加预处理步骤来阻止非特异性结合,比如使用高浓度的BSA或者牛血清。

2. 抗体自身发生交联:在某些情况下,多克隆抗体可能会自身发生交联,导致信号的增加。你可以尝试使用另一种不同的二抗或者更换抗体。

3. 酶标物的问题:你的酶标物可能过量,或者可能在你的稀释液中不稳定。你可以尝试降低酶标物的浓度,或者更换稀释液的配方。

4. 污染:这可能是由于实验室环境或者试剂的污染导致的。你可以尝试更换所有的试剂和耗材,以排除这个可能性。


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