做ELISA实验，三遍，复孔之间重复性差异很大是什么原因呢？

差异大是多大？一般要求不能超过15%，竞争法有时20%也能接受

还有不要压着标曲的检测下限去测量，尽量高中低三档同时观察，非压着检测限的值去测，肯定容易重复性差

标曲一定要做好，r2＞0.99以后再谈别的，要看计算后的浓度值，不能看OD读值。每次实验标曲必做。标曲拟合方程尽量用4pl，拟合度更好

最主要的应该是洗板问题，需要洗干净，甚至用枪头沿侧壁吸干净。

甚至有钱的去买洗板仪。

考虑还是实验条件的差异，每个孔内存在条件差异，才会重复性差。

建议从以下几点考虑：

1、每次使用新的封板膜，避免试剂挥发、交叉污染干扰；

2、标准品溶解方式，稀释梯度是ELISA实验的关键步骤，需严格按照说明书操作；

3、移液器的使用，确定移液器移液准确，且建议每次选用相同的移液方式；

4、操作流程控制一致:多通道移液器or单通道移液器。选用ELISA震荡摇床，确保样品充分孵育结合；

5、建议选择高、中，低不同区段进行观察，勿仅选择检测限位置样本。

可能是你样品不均匀。使用连续加样法可以减小误差。

重复性差好像是Elisa的通病，包括类似的一些蛋白活性检测实验也是如此，可能不是操作的问题，是试剂盒包被的问题。

低着管口没问题，要看加完枪头有没有残留，有的话也会影响的

复孔间重复性差的原因可能有多种：

1.样品预处理差异：样品预处理过程中可能存在差异，如提取效率不同、提取稀释比例不一样等。

2.反应液不均匀：液体在滴加或倒置时可能不均匀，影响试剂配制和使用。

3.滴加/倒置误差：如果在滴加或倒置样品时出现误差，也可能导致复孔间的差异。

4.枪头问题：使用的枪头的状态和质量可能不同，导致加样误差。

建议您仔细检查样品预处理流程和试剂配制过程，确保液体在加样过程中均匀，并使用相同质量的枪头。