实验标本存在内源性干扰物怎样解决？

（1）稀释标本：这在判断急性病原体感染的特异IgM抗体如抗HAVIgM，抗HBclgM， TORCH的IgM抗体检验等尤为有用。因为急性感染时，血循环中特异的IgM抗体滴度通常很高，而RF滴度通常相对要低得多。因此，在测定前对标本进行稀释，特异的IgM因高滴度存在仍可检出，而非特异的RF则会因为稀释变成非常低的滴度，从而对测定几乎不产生干扰。现在，有些特异IgM检测Elisa试剂盒不要求稀释标本，直接检测，这样虽然方便了实验室技术人员的操作，但容易出现假阳性结果，并且由于某些慢性感染，如HBV的感染，血循环中抗HBelgM可持续以一定的滴度存在，标本不做稀释即进行检测，即可出现阳性结果，从而失去抗HBclgM用于HBV急性感染的诊断价值。因此，在临床实验室，一定要使用要求对标本做1:1000稀释的试剂盒进行检验，从而保证相应检测项目结果的可靠性及临床应用价值。

（2）改变酶标抗体：由于RF结合的是IgG的Fc片段，如果将待酶标的抗体的F，片段酶切夫除，仅留下具有特异结合功能的F（ab’）2部分标记酶，则在测定中即可避免RF的干扰。

（3）标本中RF用变性IgG预先封闭：将经热变性（63℃，10min）的动物如兔、羊等的IgG加入到标本稀释液中，或是将该变性IgG连接至一颗粒固相如聚苯乙烯微球或微孔，然后加入临床血清标本，反应后，再吸出标本进行检测。此外，在测定特异IgM时，也可使用抗人IgG去除临床标本中RF和IgG。

（4）测定抗原时，可在标本中加入可使RF降解的还原剂：如2—巯基乙醇。2—巯基乙醇等还原剂可使抗体内的巯基裂解，因而可以去除RF的干扰，但只适用于抗原测定。

（5）包被或酶标二抗使用特异的鸡抗体IgY：RF不与鸡IgY反应，如果包被和酶标二抗均为鸡IgY抗体，则不受标本中RF的干扰。

可能影响ELISA结果的内源性干扰因素一般包括类风湿因子、补体、异嗜性抗体等等

避免类风湿因子RF对ELISA测定的干扰，可以：1.稀释标本 2.将待酶标的抗体的F片段酶切除，仅留下具有特异结合功能的F(ab’)2部分标记酶 3.标本中RF用变性IgG预先封闭

对于补体，可以通过对临床血清标本加热来灭活

异嗜性抗体可以通过在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig来封闭

1.异嗜性抗体

（1）使用特异的兔F（ab’）2。片段作为固相或测定酶标抗体。

（2）在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig，封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。

（3）使用靶特异的非Ig亲和蛋白（affibody）替代固相或酶标抗体之一。采用噬菌展示来自单个金黄色葡萄球A蛋白（SPA）联合文库的人IgA结合亲和蛋白，用于IgA的测定，不受异嗜性抗体的影响。

2.由抗鼠抗体引起的干扰

（1）使用的特异的抗体（F，。bf）:片段作为固相或测定酶标抗体。

（2）在标本或标本稀释液中加入过量的鼠Ig，封闭可能存在的抗鼠抗体。

（3）使用特异的鸡抗体IgG作为固相和测定抗体。鸡IgG不与人抗鼠抗体反应。因而，用其作为固相或酶标抗体不会出现假阳性结果。

3.自身抗体 自身抗体如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛索等，能与其相应靶抗原结果形成复合物，在Elisa方法中可干扰相应原抗体的测定。为避免以上情况出现，可在测定前用理化方法将其解离。

4. 溶菌酶溶菌酶可与等电点较低的蛋白有强的结合能力。免疫球蛋白等电点约为5，因此，在双抗体夹心法Elisa测定中，溶菌酶可在包被的IgG和酶标的IgG间形成桥接，从而导致假阳性。因此，为保证Elisa测定的可靠性，有必要从标本中去除溶菌酶或将其封闭，Cu2+离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶，防止其连接IgG。