酶联免疫吸附（ELISA）实验

实验分类：

免疫学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位。（2）研究抗酶抗体的合成。（3）显现微量的免疫沉淀反应。（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。

来源：丁香实验

操作方法

双抗体夹心法（测抗原）

一、包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。二、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。三、每凹孔加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37℃作用1～2小时。四、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，

间接法（测抗体）

一、包被抗原：用包被缓冲液稀释抗原至最适浓度（5～20 ug/ml）各0.3 ml加于微反应板每个凹孔中,4℃过夜或37℃水浴2～3小时，贮存冰箱。二、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。三、加被检标本：每凹孔加入用含有0.05%吐温-20的稀释缓冲液稀释的被检血清各0. 2ml，37℃，作用1～2小时。四、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲

竞争法测抗原

一、包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 ug /ml），每凹孔加0.3 ml，4℃过夜，或37℃水浴3小时，贮存冰箱。二、洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（含0.05%吐温-20）洗3次，每次5分钟。三、分2组，a组加酶标记抗原和被检抗原混合液0.2 ml，b组只加酶标记抗原液0.2 ml，37℃作用1～2小时。（混合液可作成不同稀释度）四、洗涤：移去包