磷酸化蛋白的 WB 检测怎么操作才能避免去磷酸化？

在lysis里加入蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂

检测磷酸化蛋白时加入磷酸酶抑制剂

磷酸化蛋白 WB 时 , 用 TBST 洗时也要注意一下 , 摇床的转速不要太快 , 洗的时间不要太长 , 孵育一抗和二抗之后分别洗 5min 3 次即可 , 宁愿 background 深一些 ，另外，洗的时候，最好不要把几张membrane 叠在一起洗。

一定要在 lysis buffer 中加入蛋白酶抑制剂(配方见后页)，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使 band压出来也会很浅，结果也不可信。