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跑电泳时,结果不清晰咋办

相关实验:免疫印迹(immunoblotting)

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洛噜啦噜啦嘞

求解

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4 个回答

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府宅

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原因有很多。第一,蛋白上样量可能太少了;第二,上样蛋白太杂了,没有纯净的条带;第三,上样蛋白含盐量或其他离子量太高;第四,配置的胶浓度不合适;第五,样品蛋白经过上样处理液处理的不够充分;第六,胶脱色后浸泡过久等等,还是要结合你自己试验的过程来分析才行

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bamboopiggy

有帮助

1.确定胶浓度合适,尽量让条带比较直。2.转膜三明治夹心弄好。

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未来9

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结果不清晰可能的原因及建议:

①你所检测的样本中不表达目的蛋白,选择表达量高的细胞作为阳性对照,用于确定检测样本是否为阴性,同时查阅文献。

②检测样本低表达目的蛋白,提高上样量,裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。

③转移不完全或过转移,可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头;适当调整转膜的时间和电流。

④抗体不能识别测试种属的相关蛋白,购买抗体前应当认真阅读抗体说明书,确定其是否能够交叉识别测试种属的对应蛋白。

⑤一抗孵育时间不足,建议4℃结合过夜。

⑥二抗与一抗不匹配,选择针对一抗来源的种属的抗体。

⑦洗膜过度,洗膜时间不宜过长,加入的去垢剂不宜过强或过多,建议使用0.1%的弱去垢剂Tween-20。

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天一湖医者

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1:点样过多,到达了膜边缘,会导致边缘效应,蛋白质会混和在一起,导致图谱不清晰,不整齐。

2:放置膜在电泳装置中时,两边缘的气泡未排干净,会导致图谱断点。

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