登录
搜索
提问
我要登录
|免费注册
首页
|
实验问答
|
蛋白质
实验问答
16,983,696 科研人在看
科研学霸天团,48小时有问必答
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
如何选择合适的分子伴侣
Eason老歌迷
我认为需要根据你要表达的真核蛋白的特性去选择相应的分子伴侣。常用的分子伴侣有Trx、GST、DsbA等,它们使得许多外源基因能在E.coli里正确折叠,如IL—11、IGFBP-3、INF、 Insulin甚至包括结构复杂的tPA等均可获得正确折叠的重组可溶性活性蛋白。
1 回答
735 围观
1 回答
735 围观
去回答
问
准备跑WB的蛋白煮过以后冻了3个月-20℃,再次拿来跑上样量需要多加吗?蛋白浓度会变化吗?
秋秋欣欣
-20三个月的话蛋白可能会有些降解了,大概20-30ug上样量先跑看看
3 回答
2198 围观
3 回答
2198 围观
去回答
问
WB蛋白裂解问题提问
汤姆卜丽波
我们用的也是这种。一般不会补加。可以不加
3 回答
381 围观
3 回答
381 围观
去回答
问
常规35-200之间的蛋白,应该用0.45还是用0.2um的转膜纸(pvdf)呢
whilt-shirt
0.45um的就可以,如果是小于10kd的蛋白那就要0.22um的
4 回答
2046 围观
4 回答
2046 围观
去回答
问
胶的浓度与已知目的蛋白分子量,怎么确定用什么浓度的胶呢。。我们目前买的是固定比例的啊
太阳阳了
10%最常用,如果你跑的蛋白差距特别特别大的话也可以用梯度胶
3 回答
349 围观
3 回答
349 围观
去回答
问
文中提到用ncbi确定蛋白是内源还是外源,外源蛋白是不是全长序列;是否是二聚体或多聚体;等,想请问有人可以分享下查的具体指引吗?
wenfengzhu
内源性蛋白或外源性蛋白要看查询结果,直接在NCBI输入要查询的蛋白名称,最好为英文,看是自身表达,同源性基因表达出的为内源性蛋白,外来异物细胞免疫或体液免疫等出现的蛋白是外源性蛋白,此外,体外培养的,或者看和宿主是否有同源异质性,所谓同源性异质性物质,指同一种属的不同物质,有为内源,无为外源。从而确定是为内源还是外源,还要看它们的氨基酸组成,以及连接氨基酸的肽键,看是否有基团的末端切除或丢失,从而
2 回答
729 围观
2 回答
729 围观
去回答
问
内参(β-actin)出现多条带,如何判断哪条带才是actin?
Eason老歌迷
我们都是很清晰的一个条带,因为内参很好跑。你要说内参为啥多条带,如果要是让我想原因的话,我觉得很可能是loading buffer 里面的DTT可能变质了。
4 回答
3669 围观
4 回答
3669 围观
去回答
问
内参总是跑不齐该怎么办?
Eason老歌迷
一个是你要确保你的上样量是一样的。然后配胶一定要混匀。还可能是你跑胶时电压设置的问题。
5 回答
1794 围观
5 回答
1794 围观
去回答
问
WB转膜后pvdf膜保存。
府宅
一般常用膜保存液的配方为:水﹕甘油﹕亚硫酸氢钠=79﹕20﹕1保存液温度在5~40℃
4 回答
1879 围观
4 回答
1879 围观
去回答
问
质谱检测到的蛋白质翻译后修饰差异,免疫沉淀无法成功验证怎么办?
Eason老歌迷
目标蛋白的PTMs研究通常需要一个富集步骤,因为修饰蛋白的丰度一般较低。大多数PTMs检测方法都是结合富集策略开发的,以最佳识别、验证和研究目标蛋白中PTMs的功能。你可以提高纯化浓度。
3 回答
187 围观
3 回答
187 围观
去回答
问
WB 转膜后的pvdf 膜保存。
秋秋欣欣
放在TBST 里4度保存,几天没有问题
5 回答
5561 围观
5 回答
5561 围观
去回答
问
免疫沉淀IgG出现条带怎么改进?
Eason老歌迷
珠子少加点,wb抗体稀一点,曝光时间短一点。珠子抗体这些不要贪多,不然容易有非特异性条带
3 回答
799 围观
3 回答
799 围观
去回答
问
膜蛋白IP裂解液及裂解方式是什么?
天一湖医者
通过破坏细胞膜和蛋白间的相互作用等方式裂解组织或细胞;
3 回答
1375 围观
3 回答
1375 围观
去回答
问
请问各位前辈条带反白是什么原因导致的
Eason老歌迷
你这是二抗孵育时间太长了,你下次缩短一点孵育时间看看。
3 回答
549 围观
3 回答
549 围观
去回答
问
有个比较奇怪的问题,请问同样用10%的胶跑了两个分子量都是十几的目的蛋白,称为A和B,为什么A蛋白条带很粗,而B蛋白条带正常
bamboopiggy
可能你a蛋白的表达量高啊,b蛋白的表达量一般
4 回答
141 围观
4 回答
141 围观
去回答
问
小分子量的蛋白 用15%的胶可以分出来吗?条带大小7KD
秋秋欣欣
15%的胶最佳分离范围为10-40kda, 应该也可以的
4 回答
1014 围观
4 回答
1014 围观
去回答
问
封闭之后,需要洗膜吗?
天一湖医者
需要,封闭完成后要进行洗膜,以去除膜上未结合的封闭试剂
4 回答
4065 围观
4 回答
4065 围观
去回答
问
收细胞样本时候看着很多,每组加30微升裂解液裂解细胞提蛋白后BCA定量蛋白浓度低,原因?
inventbiotech
如果是在板子里直接进行细胞裂解蛋白提取,样品很多是,裂解液粘稠糊在板子上会影响蛋白得率,板子上直接操作,还会存在因裂解液不强导致的细胞未被裂解,致使蛋白浓度过低。
4 回答
364 围观
4 回答
364 围观
去回答
问
到底是应该选择半干转还是湿转?
n0y0j7
对于需要加长时间进行转移的大蛋白而言,湿转移更适合。半干时间短,省转膜液
3 回答
774 围观
3 回答
774 围观
去回答
问
请问,为何细胞里和组织里相同蛋白跑出来的位置不一样? 所配的胶等步骤都是一样,而且重复过很多次。
bamboopiggy
你细胞和你的组织是一个种属的?是同一个器官的?不同器官收的蛋白样,可能跑的位置也不一样。
3 回答
224 围观
3 回答
224 围观
去回答
1
•••
112
113
114
115
116
•••
169
跳至
页
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序