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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
免疫组化和 Western Blot 可以用同一种抗体吗?
whilt-shirt
大部分可以,有些不可以,具体要看抗体的说明书
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问
大分子蛋白总转不出来,该如何调节电泳条件?
dxy_a3w222q8
大蛋白先试试marker能转上吗,如果能应该没问题,如果不能适当在此基础上延长转膜时间;蛋白的上样量也可以加大吧,可以试试。
6 回答
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问
蛋白质微阵列技术的影响因素有哪些?
迟C迟
蛋白质微阵列就是蛋白芯片技术,固定在芯片上的蛋白可以是:抗原、抗体、小肽、受体和配体、蛋白质-DNA和蛋白质-RNA复合物等。所以影响因素包括样品质量、检测技术和数据分析。
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问
蛋白质免疫印迹试验结果膜上没有目标条带是怎么回事?
whilt-shirt
考虑转膜没转上或者一抗二抗失活
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问
双向凝胶电泳为什么能一次性分离上千种蛋白质?
bamboopiggy
因为双向电泳一个方向分辨出不同分子量的蛋白,另外一个方向是同样分子量的蛋白,有不同的电荷,按照电荷的多少,再将同样分子量的蛋白细分,所以能从电荷和分子量两个方面来区分蛋白。
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问
谷类蛋白质凝胶在实际生活中有那些应用?
未来9
对各种水进行过滤、分离,从而对水质进行纯化处理。
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问
染色质为什么要片段化?片段化的长度为什么是200-1000?片段化过度或不足对实验会有什么影响?
bamboopiggy
你说的是做chip吧?chip是要把染色质打断,好让你的目的蛋白和dna更好的结合,太长了构象复杂,不利于蛋白质和dna的结合,一般打的片段,在200-1000bp之间,就可以。太小了,可能结合不好。
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问
蛋白样品可不可以反复溶解?
小暮
最好不要反复冻融 蛋白样品在制备后建议分装,用多少,拿多少
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问
两步法和一步法有何优劣呢?在什么情况下要选择其中一种有没有要求?
bamboopiggy
其实这个要看你的实验目的,单纯的要跑realtime pcr,一步法,两步法都可以。但是如果想同时拿cdna做别的实验,就用两步法。先得到cdna,再跑realtime。一步法简单,省时间。两步法,稍微复杂,但是也不难做。
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问
想要精确产量,怎么做RNA定量呢?除了买仪器还有什么方法吗?
bamboopiggy
可以将rna稀释,然后再去测浓度,一般浓度值在1000左右比较好。
3 回答
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问
如何检测不同批次的RNA之间的差异,有什么好方法能避免批次差异呢?
迟C迟
不同批次提出来的RNA有差异是在所难免的,只要提取质量高、浓度达到要求,一般不影响接下来的实验。
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问
最终PCR反应中假阳性结果,可能是RNA 中存在的基因组DNA,怎么去除gDNA呢?
whilt-shirt
现在有去除gDNA的逆转录试剂盒,可以试试
4 回答
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4 回答
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问
CO-IP实验怎么区别是两种蛋白直接结合还是有其他蛋白辅助相互作用?
邓豆豆逗
Co-IP只能证明两种蛋白有相互作用,无法说明是直接还是简介的,如果想知道是直接还是间接的,可以做GST pull-down实验。
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问
CO-IP实验如何检测低亲和力或者短暂作用的蛋白相互作用?
未来9
COIP的缺点之一就是可能检测不到低亲和力和瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用,应该做不到这个效果
3 回答
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3 回答
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问
CO-IP实验如何确定蛋白相互作用是发生在细胞中的,而不是由于细胞破裂溶解释放蛋白产生了互作?
lyang556
细胞裂解时采用温和的裂解条件,应采用非离子变性剂(如:NP40),这样能够不破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用。要想明确蛋白间的相互作用是细胞中发生还是细胞的溶解才发生需要进行蛋白质定位。
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问
第一次做CO-IP实验,有什么注意事项?请做过的大佬们提提经验避避雷
lyang556
首先明确实验目的,确定抗体和需要捕获蛋白。然后注意研究实验步骤,可以参阅别人的实验经验,少走弯路。选择合适的试剂,操作时要认真,尤其是样本制备和Pre-clearing过程。
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问
wb实验怎么选择抗体,设计实验能省一点钱呢?
bamboopiggy
1.做预实验。2.尽可能的把蛋白条带的size错开。如果就几条带,可以把胶切小了,减少膜的用量。尽量切膜,加抗体,不要加全膜,除非实验必须。3.找公司申请抗体的试用装,或者找别的实验借。
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问
我现在手头有个融合蛋白,纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析,之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。什么原因怎么解决
lyang556
估计是你的蛋白失活了,应该注意下实验步骤,看看提取、纯化、酶切具体是哪一步操作不当导致的,搞清楚后重做试试!
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问
westerblot条带弯曲怎么办
bamboopiggy
胶配的时候,注意混匀。低电压,延长跑胶时间,跑胶的时候注意降温。
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问
电极法测电解质中直接法与间接法的区别?
dxyv9281
1、ISE的直接法和间接法的区别在于直接法未作稀释直接测定,间接法预先稀释后测定,但是两种方法测定的都是离子活度.2、比较ISE法与火焰光度法之间是存在偏差的,ISE法偏高,造成这种差异的原因是:火焰法测定的是血浆中的钠、钾浓度;而电 极法测定的是血浆或是血清水中的钠、钾浓度。电极法摒弃了样品中蛋白质和脂类等大分子所占体积,也就是称为基质效应,导致了电极 法的结果偏离。对于ISE法中的直接法与间接
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