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小鼠血清能用PBS稀释吗?
whilt-shirt
PBS是等渗溶液,理论上是可以的
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问
WB.结果分析
whilt-shirt
应该是数据之间差异比较大,建议调整曝光时间使条带颜色差不多试试
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问
融合蛋白结构域连接可以嘛?
bamboopiggy
还是要用linker的,直接融合会影响蛋白的折叠
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问
最近在做毕赤酵母蛋白诱导,总是失败?
Eason老歌迷
可能是有几个原因。如果用GS115表达不出蛋白,我们换成KM71H后,大部分克隆能表达。 我们尝试过在28度和室温下诱导表达,表达水平可能都不低。ph的话就选择用6.0——6.8,BMMY的pH7.0-7.5比较合适。
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问
蛋白纯化时发现沉淀出现问题?
Eason老歌迷
硫酸铵沉淀是很粗的分级方法,建议你精纯的话还是要过柱子的。
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问
原核诱导蛋白,相关问题求助?
Eason老歌迷
诱导的蛋白只在沉淀中,上清中没有,这个现象很正常,我也遇到过。你可以提前去biotech上查看预测蛋白可溶性问题。在或者看你的外源蛋白是否含有稀有密码子,如果有的话建议使用Rosetta表达菌株。
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问
蛋白在纯化时,如何定量?
Eason老歌迷
蛋白质含量方法常见的有以下四种。根据物理性质:紫外分光光度法。据化学性质:凯氏定氮法、双缩脲法、Folin-酚试剂法(Lowry法)、BCA法、胶体金法。根据染色性质:考马斯亮蓝染色法、银染法。根据其他性质:荧光法。我们实验室更喜欢用考马斯亮蓝染色法。
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问
有人知道做体外蛋白修饰抗体法验证时,考马斯亮蓝染色的作用?
Eason老歌迷
做体外蛋白修饰抗体法验证时,考马斯亮蓝染色的作用: 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝在酸性条件下为棕红色,其所含的疏水基团在酸性条件下雨蛋白质的疏水区具有亲和力,通过疏水作用与蛋白质相结合,形成蓝色的蛋白质染料复合物,在5
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问
胰蛋白酶分子印迹洗脱相关求助?
冷泉港蛋白
一、如果要从sds-page胶条拿到蛋白:蛋白与胶条之间相互作用力很弱,也不是离子相互作用,氯化钠作用不大。方法1.切胶,研磨,溶解。参考 蛋白胶条质谱鉴定的前处理方法2.进行横向电泳二、如果要从wb膜上拿到蛋白,就比较困难了,得考虑作用力了
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问
WB上样时,直接从孔里漏到两个胶交接的地方
bamboopiggy
是你上层胶没有凝固好吧,一般上层胶的凝固速度,要比管里剩下的胶要慢一些
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WB做内参,显影是没有条带
Eason老歌迷
显影没有条带,可能是几个原因,可能是显影操作问题,也可能是是切胶切错了,也可能是你封闭没有封闭好。
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问
wb背景高:有黑点;怎么办
Eason老歌迷
背景脏,可能是因为,你的封闭时间有点短,也可能是你的抗体浓度有点高。
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问
wb检测,荧光标记的二抗灵敏度高,还是化学发光灵敏度高?
whilt-shirt
理论上荧光比化学发光灵敏度要差一点,但是现在很多好的文章都会用荧光二抗
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问
wb检测,蛋白量检测下限多少呢?
趴趴不软
样品中目的蛋白的量,限于WB的检测下限问题,一般目的蛋白量最好别低于1ng(虽然ECL法下限是0.1ng,即100pg),最好在10ng以上为好。
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问
酪氨酸羟化酶(TH)WB跑不出来
whilt-shirt
是不是蛋白没提出来,试试RIPA裂解
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问
SDS-PAGE实验的问题?
whilt-shirt
有可能是浓缩胶没配好,建议重新配胶试试
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问
WB实验凝胶的问题?
whilt-shirt
是不是其他试剂过期了,建议更换新的试剂试试
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问
Werstenblot实验的一个问题?
慕容过
换新的缓冲液,或者做一组空白试试
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问
蛋白拖带特别严重,是什么原因呢?
dxy_onb1bnxq
有可能是转膜的问题,转膜转花了,也要可能是蛋白降解了,出现亚带
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问
WB一抗保存问题,我们实验室买的碧云天一抗稀释液,稀释后,4℃保存一抗,但是发现一抗用2周就不好用了,有什么办法可以延长一抗使用
sophomore
稀释后如果当时不准备用,一定放在-20℃中。否则一抗肯定会受影响。或者就是现用现配。
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