雪碧味液氮
样本是SHSY5Y,按理来说,这个细胞表达TH,应该会很好跑,但是我跑从来都是一块干干净净的白膜
样本制备:SDS直接裂解,细胞刮下来,95℃ 5min
电泳条件:60v 30min,120v 60min
转膜:0.45um pvdf,300mA 90min,(转过差不多大小的分子量,确定这个条件下不会转过),转膜液含20%甲醇
封闭:5%牛奶
一抗二抗:1:1000,18-24h,二抗1:10000,sigma,洗膜用TBST 90rpm,5min,三次
抗体:碧云天(因为之前immune star的抗体用完了,只有一只去年师姐剩下immune star的抗体,孵了没有,估计也不好用了)1:1000,同样用小鼠黑质和纹状体的样本,该抗体就特别好用,跟内参一样好曝,我的细胞上样量为10ug,30ug,全都没有条带
求助🙏 🙏 🙏 🙏 🙏
Eason老歌迷
我觉得不是抗体的问题,是不是你电泳或者转膜的问题呢?或者是你提蛋白没提好,蛋白降解了。你用丽春红染一下色看看有没有条带。
whilt-shirt
是不是蛋白没提出来,试试RIPA裂解