酪氨酸羟化酶（TH）WB跑不出来

样本是SHSY5Y，按理来说，这个细胞表达TH，应该会很好跑，但是我跑从来都是一块干干净净的白膜

样本制备：SDS直接裂解，细胞刮下来，95℃ 5min

电泳条件：60v 30min，120v 60min

转膜：0.45um pvdf，300mA 90min，（转过差不多大小的分子量，确定这个条件下不会转过），转膜液含20％甲醇

封闭：5％牛奶

一抗二抗：1：1000，18-24h，二抗1：10000，sigma，洗膜用TBST 90rpm，5min，三次

抗体：碧云天（因为之前immune star的抗体用完了，只有一只去年师姐剩下immune star的抗体，孵了没有，估计也不好用了）1：1000，同样用小鼠黑质和纹状体的样本，该抗体就特别好用，跟内参一样好曝，我的细胞上样量为10ug，30ug，全都没有条带

求助🙏 🙏 🙏 🙏 🙏