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丁香通

跑PCR,遭遇没有目标引物序列出现

相关实验:巢式 PCR

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dxy_btpk2zd7

测序结果无引物菌液送测,返回序列中有载体,但并没有我自己设计的引物序列.用设计引物跑PCR和通用引物跑菌液PCR时有明显且单一的条带,我该如何改进呢,请各位大佬帮帮忙?

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4 个回答

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天一湖医者

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你拿到的测序结果,是从引物开始后面30-50个碱基以后开始的序列,引物序列是看不到的。这个和测序机器的性能有关。一般从引物开始的一小段序列出峰会很不稳定,有稳定峰图可以读出序列一般都是20-30个碱基之后了。你手头若是有峰图结果你看看最开始那段的峰图就知道了。

至于拿到的序列到底是什么,ncbi上blast一下不就什么都知道了

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Eason老歌迷

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简单粗暴的做法是,全部都换,引物重新按照原来的序列合成,溶解引物以及实验过程中的水全部换成干净的,最好全部都是depc水,枪头,板子,酶也换。如果还是失败的话再找原因。

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bamboopiggy

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那有没有你的目的条带呢?你的引物扩增出目的条带以后,只要接头对,不一定非要原版原的出现引物序列啊

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汤姆卜丽波

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有点看不懂就是说测序回来的结果是空载对吧,然后菌液pcr不论是通用还是特异性引物都有条带?

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