我做的RT-PCR，没有结果，上火啊
丁香园论坛
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我要检测一个受体蛋白，提取的脑组织，Trizol提取组织RNA，加异丙醇离心后能见到明显的沉淀，按照TakaRa 的RNA LA PCR KIT(AMV) VER.1.1说明书操作，在逆转录后PCR不再加dNTP。逆转录后PCR用actin引物能模糊扩出一些东西，但有两条以上的带(第二次都快扩成100bpMARKER了！）。目的片段干干净净什么都没有！目的片断的引物一个是外国文献上的，一个 是自己设计的，都没有扩出来。
小弟还菜，想大家给点建议，体系、PCR过程、胶图如下：
逆转录：
MgCl2 4ul
10×RNA PCR Buffer 2ul
RNase Free dH2O 8.5ul
dNTP Mixture(各10mM) 2ul
RNase Inhibitor 0.5ul
AMV Reverse Transcriptase 1ul
Oligo dT-Adaptor Primer 1ul
样品RNA 1ul
30℃ 10min
50℃ 30min
99℃ 5min
5℃ 5min
PCR：
MgCl2 1.2ul
10×LA RNA PCR BufferⅡ 1.6ul
(Mg2＋ Free)
灭菌蒸馏水 11.1ul
TaKaRa LA Tag 0.1ul
P1 1ul（10pmol)
P2 1ul（10pmol)
Templet 4ul
94℃ 3min 1 cycle
94℃ 30s
56℃ 30s 30 cycle
72℃ 40s
72℃ 8min
4℃ 保存
小弟还菜，想大家给点建议，体系、PCR过程、胶图如下：
逆转录：
MgCl2 4ul
10×RNA PCR Buffer 2ul
RNase Free dH2O 8.5ul
dNTP Mixture(各10mM) 2ul
RNase Inhibitor 0.5ul
AMV Reverse Transcriptase 1ul
Oligo dT-Adaptor Primer 1ul
样品RNA 1ul
30℃ 10min
50℃ 30min
99℃ 5min
5℃ 5min
PCR：
MgCl2 1.2ul
10×LA RNA PCR BufferⅡ 1.6ul
(Mg2＋ Free)
灭菌蒸馏水 11.1ul
TaKaRa LA Tag 0.1ul
P1 1ul（10pmol)
P2 1ul（10pmol)
Templet 4ul
94℃ 3min 1 cycle
94℃ 30s
56℃ 30s 30 cycle
72℃ 40s
72℃ 8min
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