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基因的扩增,总是跑不出来,是什么原因呢?

相关实验:巢式 PCR

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dxy_fv5ps10q


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4 个回答

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毛利小五郎的徒弟

有帮助

扩增失败,大概率是引物的原因。

建议:拿到新引物后应从 Tm- 5℃ 寻找其适宜的扩增温度,在某温度起为特异性扩增。


然后,在特异性扩增的温度下检测扩增效率:将 cDNA 梯度稀释(一般为 2×),测试稀释后的样本 Ct 值差异是否为 1 左右。


1、若差值为 1,则扩增效率良好,可进行正式实验。


2、若在特异性扩增的温度范围内不能使 Ct 值差异为 1,则需考虑重新设计引物

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huarenqiang5

有帮助

考虑以下几点原因:1.模板不干净;2.引物设计不当;3.退火温度过高等等。

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sswei

有帮助

引物设计特异性太差,样本中含有抑制扩增的物质等原因。

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loveliufudan

有帮助

如果你的扩增反应总是无法成功,可能有几个原因:

1. 引物设计问题:引物是PCR中至关重要的组成部分,需要与目标基因序列匹配。如果引物序列有误或与目标序列不匹配,扩增可能会失败。确保引物序列正确,并与目标基因的序列相匹配。

2. DNA质量问题:PCR反应需要高质量的DNA作为起始材料。如果DNA样本受到污染、降解或浓度过低,扩增可能会失败。确保使用纯净、完整且适当浓度的DNA。

3. 酶或缓冲液问题:PCR反应中使用的聚合酶和缓冲液也可能影响扩增的成功。确保使用高质量的酶和适当的缓冲液,按照厂家说明书中的建议使用。

4. 温度和循环条件问题:PCR反应需要特定的温度和循环条件。确保反应体系在每个步骤中达到所需的温度,并按照标准的PCR程序进行循环。

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