基因的扩增，总是跑不出来，是什么原因呢？

扩增失败，大概率是引物的原因。

建议：拿到新引物后应从 Tm- 5℃ 寻找其适宜的扩增温度，在某温度起为特异性扩增。

然后，在特异性扩增的温度下检测扩增效率：将 cDNA 梯度稀释（一般为 2×），测试稀释后的样本 Ct 值差异是否为 1 左右。

1、若差值为 1，则扩增效率良好，可进行正式实验。

2、若在特异性扩增的温度范围内不能使 Ct 值差异为 1，则需考虑重新设计引物

考虑以下几点原因:1.模板不干净；2.引物设计不当；3.退火温度过高等等。

引物设计特异性太差，样本中含有抑制扩增的物质等原因。

如果你的扩增反应总是无法成功，可能有几个原因：

1. 引物设计问题：引物是PCR中至关重要的组成部分，需要与目标基因序列匹配。如果引物序列有误或与目标序列不匹配，扩增可能会失败。确保引物序列正确，并与目标基因的序列相匹配。

2. DNA质量问题：PCR反应需要高质量的DNA作为起始材料。如果DNA样本受到污染、降解或浓度过低，扩增可能会失败。确保使用纯净、完整且适当浓度的DNA。

3. 酶或缓冲液问题：PCR反应中使用的聚合酶和缓冲液也可能影响扩增的成功。确保使用高质量的酶和适当的缓冲液，按照厂家说明书中的建议使用。

4. 温度和循环条件问题：PCR反应需要特定的温度和循环条件。确保反应体系在每个步骤中达到所需的温度，并按照标准的PCR程序进行循环。