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各位大神,想问一下qPCR扩增曲线中为什么会有弧形的曲线?怎么解决?
今晚月色真美_
模板浓度过高,预变形时间不足,引物不特异等等原因。你调整下上述因素重新扩增试试
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问
提取RNA做逆转录,然后用逆转录的c DNA做荧光定量PCR。结果发现没有扩增成功,一直在0上下波动,是什么原因呢?
灵枢天问
是不是你的SYBR出了问题,失效了或者提出来的RNA降解了
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问
qPCR的图方差很大怎么办?
juyue2010
若是技术重复导致的话,是操作问题,先做好mix,再分别加到每个孔,操作时间别太长,加好样直接上机。若是生物重复导致的话,那就是说样品处理平行度差
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问
小鼠GAPDH内参可以扩大鼠吗
Dr_劉医生
可以用,鼠源的管家基因都是同源的,GAPDH都可以用
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问
第二次pcr跑出来的条带和第一次pcr跑出来的位置不一样,这是什么原因?
灵枢天问
可能是第一次的RNA有降解,逆转录出来的模板本身就有问题,所以p出来条带也有问题,太小了,你可以发个图片过来看看
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问
在做PEDV、TGEV鉴定时,需要阳性对照,可以用该病毒的疫苗做阳性对照吗
毛利小五郎的徒弟
一般都是用野毒株做阳性对照的。
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问
家人们,qpcr的数据p值是在grafpad里面算出来,直接标在数据上吗
juyue2010
graphpad统计分析后,在图上添加
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问
meta分析
Dr_劉医生
完全可以,你只提取A,B方案的原始数据进行分析就可以,但RCT的纳排标准得符合
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问
CasRx系统引物设计
毛利小五郎的徒弟
1.sgRNA设计1.1设计原则1) II型CRISPR系统(SpCas 9)的sgRNA 靶点一般为20nt2)sgRNA序列的碱基组成:基因特异的sgRNA 模板序列位于PAM 序列前,PAM序列的特征为NGG (N可以为任意核苷酸)3)sgRNA的序列应避免以4个以上的T结尾,GC%含量为30%-70%4)sgRNA的序列与On-target和Off-target的匹配数都应尽可能的高。5)
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问
自己做的兔抗多克隆抗体,在目的条带的位置出现非特异性条带怎么解决
毛利小五郎的徒弟
这样就需要调高筛选精度,尽量把非特异性条带筛选掉
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问
求助:qPCR的溶解曲线分析
juyue2010
没什么问题,溶解曲线,是求导得出的,前边双链数量变化很小
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问
qPCR标曲低浓度曲线分不开,模板超声没用
毛利小五郎的徒弟
建议更换引物探针,高重复性容易导致曲线不明显
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问
为什么PCR不加模板,只加水也会有条带,可能是单引物扩增的产物吗?
dxy_0n2bux32
如果片段比较小的话有可能是引物二聚体,片段大的话可能是污染了
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问
请问各位大佬这样的曲线前面好杂乱是怎么回事啊
毛利小五郎的徒弟
有可能是有一些小污染,导致在起始方向存在误差。
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问
如何根据保守序列设计简并引物?
junyong151
设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域, 且两个保守区域相距50~400个氨基酸残基为宜, 使得PCR产物在150~1200bp之间,最重要的是每一个保守区域至少有6个氨基酸的保守区,因为每条引物至少18bp左右。若比对结果保守性不是很强很可能找不到6个氨基酸序列的保守区,这时可以根据物种的亲缘关系,选择亲缘关系近的物种进行二次比对,若保守性仍达不到要求,则需进行三次比对,总之,究竟要选多少序
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问
实时荧光定量PCR仪中的多通道指什么,有什么用? 每个通道怎么都有颜色标记?
毛利小五郎的徒弟
针对每一种荧光的检测器,比如你在一个管中做多个颜色,针对多个靶基因。每个颜色需要一个检测器来检测荧光信号的强弱,每一个针对不同颜色的检测器,就是一个通道
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问
Ncbi上SNP位点附近核苷酸序列没有了?
毛利小五郎的徒弟
这个版本可以后退一页进行查看的。
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问
PCR验证Circ RNA环状特性实验gDNA一直可以出条带
毛利小五郎的徒弟
考虑还是引物设计的不恰当,重新设计一下引物。
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问
酶切前,出现2 ,3条带的原因是什么?
Dr_劉医生
应该是降解了,导致引物的分子量不一致,
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问
RT-LAMP假阳性问题
灵枢天问
你再拿之前没加的做一次看看是不是你的试剂污染了
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